逄亚宁，杨国平，孟 余，吴利先，李光华

    (大理大学基础医学院医学微生物与免疫学教研室，云南 大理 671000)

    人类结核病是一种致病菌为结核分枝杆菌，且具有极高的感染率与致死率的传染病。结核病素有“白色瘟疫”及“头号杀手”之称，已成为全球范围内备受关注的影响人类生活质量的公共卫生问题[1，2]。随着耐药株的广泛流行及人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus，HIV)双感现状使得结核病的疫情变得更加严峻[3，4]。特别地，随着近年来新型冠状病毒的爆发，使得原本严峻的疫情面临着更大挑战，面对日趋紧迫的结核病疫情现状，接种疫苗是一种行之有效的控制方式[5]。卡介苗是目前临床上唯一用于预防结核病的疫苗，可有效降低儿童结核性脑膜炎及粟粒性结核病的感染，但对成人的保护效果并不理想也并不稳定[6]。因此，研制一种免疫效果更加理想的结核病疫苗已成为当务之急。巨噬细胞是结核分枝杆菌的主要宿主细胞，也是机体抵御该病原菌的重要免疫细胞。凋亡是巨噬细胞清除吞噬的结核分枝杆菌的关键免疫机制之一，因此可通过巨噬细胞凋亡入手，研制一种更加具有保护效力的疫苗用于结核病的防控[7，8]。线粒体凋亡是真核细胞主要的内源性凋亡途径，Bcl-2 蛋白家族是线粒体凋亡通路的主要调控因子，Bid 蛋白是Bcl-2蛋白家族中重要的一员，不仅可以结合抗凋亡蛋白抑制其抗凋亡作用，也可以与促凋亡蛋白结合激活其促凋亡作用[9]。基于此，本实验将结核分枝杆菌分泌型蛋白Ag85b 中行使分泌作用的ASP 信号肽基因与促凋亡蛋白Bid 基因相连接，克隆入穿梭质粒pMV261 中。将重组质粒导入耻垢分枝杆菌，构建一株可分泌促凋亡蛋白Bid 的重组耻垢分枝杆菌。由于耻垢分枝杆菌是一种较结核分枝杆菌生长快且无致病性的分枝杆菌，同时与结核分枝杆菌具有高度的基因同源性和相似结构，可表达更多的外源蛋白，因此是一种极具前景意义的结核病疫苗载体。

    1 材料与方法

    1.1 资料来源 检索美国国家生物技术信息中心(NCBI)数据库(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/)，获得小鼠Bid 蛋白的氨基酸序列。通过ProtParam(https://web.expasy.org/protparam/)和ProtScale(https://web.expasy.org/protscale/)在线软件预测Bid 蛋白的理化性质；运用TMHMM-2.0(https://services.healthtech.dtu.dk/service.php?TMHMM-2.0)与SignalP-4.1(https://services.healthtech.dtu.dk/service.php?Sig nalP-4.1)分析Bid 蛋白的分泌属性；使用SOPMA(https://npsa -prabi.ibcp.fr/cgi -bin/npsa_automat.pl?page=npsa_sopma.html)、SWISS-MODEL(https://swissmodel.expasy.org/)生信工具分别预测Bid 蛋白质的二级结构与三级结构；采用NCBI 的CD-Search(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/Structure/cdd/wrpsb.cgi)工具分析蛋白质Bid 的保守结构域；应用STRING(https://www.string-db.org/)预测小鼠Bid 蛋白的相互作用网络；经NCBI 数据库获得人类蛋白Bid 的氨基酸序列 ......