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编号:448823
PEX 基因转染人脐带间充质干细胞的体外培养及鉴定
http://www.100md.com 2023年5月23日 医学信息 2023年第10期
胶质瘤,质粒,试剂盒,1材料与方法,2结果,3讨论
     谢 炯,戚 继

    (北京丰台医院神经外科,北京 100000)

    胶质瘤(glioma)是神经系统发病率最高、预后不佳的原发性脑肿瘤,胶质母细胞瘤(glioblastoma,GBM)是胶质瘤中恶性程度最高的一种,即使采用手术及同步放化疗的标准治疗方法,患者的一般生存期仅为14.4 个月左右[1]。因血脑屏障的存在,很多药物无法准确到达肿瘤病灶,但具有跨血脑屏障特性的人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,HuMSCs)可以作为细胞载体有效地将所需药物及目的基因送到靶向部位[2],进而提高胶质瘤的治疗效果。PEX 基因能够干预恶性胶质瘤的侵袭行为,在胶质瘤基因治疗中具有很好的临床应用前景。本研究主要探讨PEX 基因修饰HuMSCs 的可行性,现报道如下。

    1 材料与方法

    1.1 材料 HuMSCs(天津和泽生物科技有限责任公司提供),U87 胶质瘤细胞(中国医学科学院基础医学研究所基础医学细胞中心),DMEM/F-12 培养基(美国GIBCO 公司),FBS(以色列BI 公司),胰蛋白酶(美国AMRESCO 公司),EDTA(美国Sigma 公司),青/链霉素霉素溶液(Solarvio 公司),质粒pcDNA3.1(+)(Invitrogen),JM109 高效率感受态细胞、pGEM?-T Easy 载体、RNA 提取试剂盒、逆转录试剂盒、小提质粒试剂盒、G418、转染试剂FuGENE?HD、HEPES(Promega 公司),Xho Ⅰ、BamHⅠ、T4 DNA 连接试剂盒(日本TaKaRa 公司),Universal DNA Purifieation Kit DNA 纯化回收试剂盒、大提质粒试剂盒(北京艾德莱公司),FITC 标记小鼠抗大鼠CD19、CD34、CD90、CD45、CD105 单克隆抗体(BD Biosciences 公司),引物由Invitrogen 公司合成,其它常规试剂为进口分装或国产分析纯。

    1.2 HuMSCs 培养鉴定与U87 胶质瘤细胞培养 将HuMSCs 和U87 细胞分别接种于面积为75 cm2的细胞培养瓶中 ......

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