文 丹，胥正敏，林师宇，黄 蓉

    (1.川北医学院附属医院核医学科，四川 南充 637000；2.川北医学院药学院，四川 南充 637000)

    未分化甲状腺癌(anaplastic thyroid cancer，ATC)是起源于甲状腺滤泡上皮细胞的高度侵袭性肿瘤，由于其具有失分化、恶性程度高、易发生远处转移等特点，该类患者往往预后较差、生存期不超过半年[1]。关于ATC 发病的分子机制目前仍不清楚。AXIN1 基因在多种肿瘤中表达降低并在肿瘤的发病过程中扮演着抑癌基因的角色，该基因表达异常可以导致非小细胞肺癌[2]、肝细胞癌[3]、结直肠癌[4]和胃肠道癌[5]等多种肿瘤发生。且研究发现[6]，采用重组AXIN1 过表达载体(pcDNA3.1-AXIN1)转染人胚胎肿瘤衍生细胞系NTera2 后，与对照组相比，AXIN1表达量增加，Bcl-2 表达降低。另有研究发现[7]，运用牙龈卟啉单胞菌-脂多糖(LPS-Pg)处理大鼠成骨细胞后可抑制Bcl-2 表达，而在此基础上敲低AXIN1基因后，可逆转Pg-LPS 诱导的促凋亡作用。这些研究都暗示AXIN1 和Bcl-2 基因在疾病发生过程中可能存在着某种关联，但关于二者在ATC 肿瘤中的相关性尚需研究证实。本课题组前期研究采用CRISPR-Cas9 基因编辑技术成功构建出AXIN1 基因敲除的ACT-1 单克隆细胞系[8]。基于此，本研究构建了AXIN1 基因过表达的ACT-1 肿瘤细胞系，以期在构建成功的两种工具细胞中探讨敲除及过表达AXIN1 基因对ACT-1 中Bcl-2 的影响，现报道如下。

    1 材料与方法

    1.1 材料 Nthy-ori-3-1 及ACT-1 细胞系均购自ATCC 细胞库，嘌呤霉素购自Boster 公司，兔抗Bcl-2 单克隆抗体购自CST 公司，DMEM 高糖培养基购自invitrogen 公司；胎牛血清购自NTC 公司；胰蛋白酶、二甲基亚砜、无菌PBS 及青霉素、链霉素均购自Boster 公司；总RNA 提取试剂TRIzol、焦碳酸二乙酯(diethyl pyrocarbonate，DEPC)处理水均购自ABI 公司；逆转录试剂盒购自Thermo 公司；PowerUpTMSYBRTMGreen Master Mix 购自Applied Biosystem 公司；兔抗β-肌动蛋白(β-actin)抗体、HRP 标记的山羊抗兔IgG 购自Boster 公司；兔抗AXIN1 及Bcl-2 单克隆抗体均购自CST 公司；二辛可宁酸(bicinchoninic acid ......