张秀娟，何莉莉，田 蜜，李 新

    (1.复旦大学附属华东医院普外科，上海 200040；2.荆门市人民医院甲乳外科，湖北 荆门 448000；3.荆门市公安局法医鉴定中心，湖北 荆门 448000)

    乳腺癌(breast cancer，BC)是女性中常见的高危恶性肿瘤，转移是乳腺癌患者死亡的常见原因。microRNA 是一类非编码RNA，长度为18～25 个核苷酸，参与许多癌症的发生和发展[1]，通过在转录后水平上调节基因的表达来发挥功能[2，3]。miRNA 的异常表达可以作为多种癌症的诊断指标和预后生物标志物[4]，miR-660-5p 与乳腺癌细胞的增殖，迁移和侵袭密切相关[5]。TET(ten-eleven translocation)蛋白家族是一类双加氧酶，包括3 个成员(TET1，TET2和TET3)[6，7]。TET2 在癌症中起抑制作用[8]，可促进乳腺癌的进展。PI3K/AKT/PKB/mTOR 信号通路与细胞分化，增殖和凋亡密切相关[9-11]，TET2 调节PI3K/AKT 通路促进冠心病进展[12]，TET1 通过PI3K/AKT通路参与生殖衰老过程[13]。最近的研究表明[14-16]，抑制PI3K/AKT/mTOR 信号传导是治疗乳腺癌的有效方法，但目前尚未阐明TET 与PI3K/AKT/mTOR 信号通路在乳腺癌中的作用机制。为此，本研究拟探索miR-660-5p/TET2 通过PI3K/AKT/mTOR 信号通路调节乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的调控机制，为乳腺癌的治疗提供新的靶点和依据。

    1 材料与方法

    1.1 标本来源 选取2021 年1 月-2022 年6 月荆门市人民医院65 例从未在接受过化学、放疗或其他治疗的乳腺癌患者，获取65 组乳腺癌组织和邻近的正常组织样品。获取组织后立即保存在-80 ℃冰箱中。本研究得到荆门市人民医院伦理委员会的批准，所有患者在进行根治性切除术之前均签署知情同意书。

    1.2 细胞培养 人乳腺癌上皮细胞系MCF-10A 和人乳腺癌细胞系MCF-7 和MDA-MB-231 均获自美国典型培养物保藏中心(ATCC，USA)。MCF-10A 细胞系用专用培养基培养(CM-0525)。10%胎牛血清的DMEM(Gibco)用于培养乳腺癌细胞系。所有细胞系均在37 ℃的5%CO2培养箱中培养。

    1.3 细胞转染 TET2 特异性小分子干扰RNA(si-TET2)，阴性对照(negative control，si-NC)，TET2 过表达质粒(NCBI 参考序列 ：NM_001127208.3)和空载体(vector)是从上海GenePharma 公司购买 ......