胡皓彬，凌 晖，蔡志宏，肖 萍，李艳春

    (湖南省人民医院/湖南师范大学附属第一医院病理科，湖南 长沙 410002)

    胃癌(gastric cancer)的死亡率在恶性肿瘤中名列前茅，且逐年稳步增长[1]。影响胃癌预后的因素有很多，如肿瘤干细胞(CSCs)与胃癌的预后较差有关[2]。CSCs 能促进癌细胞的生长与转移，胃癌中同样存在CSCs，即胃癌干细胞(GCSCs)[3，4]。GCSCs 的存在是胃癌难以根治的重要原因之一，因此越来越受到人们的关注。Takaishi S 等[5]最早发现CD44(+)的胃癌细胞具有干细胞特性，CD44(-)细胞的致瘤潜能更低。CD44 的表达与胃癌中的多种干细胞标志物有关，是调控细胞干样特性的中心环节[6]。CD44 普遍应用于GCSCs 的分离鉴定。GKN2(gastrokines-2)是胃粘液分泌细胞系产生的一种分泌蛋白，其在胃癌中普遍表达减少或缺失[7]。有证据表明[8，9]，GKN2 缺失是胃癌发病机制之一，并提示恢复GKN2 表达可作为抑制胃癌进展的一个策略。可以推测，GKN2 在GCSCs 中可能同样表达缺失，且恢复GKN2 的表达，对GCSCs 可能具有相似的抑制作用。为此，本研究用GKN2 高表达腺病毒载体转染CD44(+)SGC7901 细胞，即胃癌样细胞(GCSCs)，验证转染前后GCSCs 中GKN2 的表达，同时通过检测其增值、迁移、侵袭的影响，评估GKN2 对GCSCs 的抑制作用，现报道如下。

    1 材料与方法

    1.1 实验材料 人胃癌SGC7901 细胞株为南华大学肿瘤研究所保存并友情提供。人CD44 免疫磁珠及MiniMACS 分选器(Miltenyi 公司)，Alexa Fluor?488 anti-mouse/human CD44(Biolegend 公司)，载体：Ad-GFP-GKN2 表达载体和Ad-GFP 空载体(汉恒生物科技有限公司)，iBindTM仪器、iBindTM溶液试剂盒和iBindTM卡片(Life 公司)，抗体：兔抗人GKN2单克隆抗体、兔抗人β-actin 单克隆抗体、二抗羊抗兔IgG-HRP(abcam 公司) ......