姐妹染色单体互换频率影响因素的研究(2)
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1.2 方法
1.2.1SCE标本的培养与制作①取观察对象外周静脉血按本实验室微量全血培养法培养[5]，培养至6 h时加入5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU，Sigma产品)，使终浓度为10 μg/ml，继续培养至终止前12 h加秋水仙素，全程培养56 h，除实验需要外，培养过程均避光；②姐妹染色单体差别染色：培养的标本经常规制片后，根据PERRY等[6]的方法改进，即不使用荧光素染色、标本不经老化处理，直接将玻片标本置于载板上，标本面朝上，用2×SSC液(0.3 mol/L氯化钠、0.03 mol/L柠檬酸钠等量混合)加在玻片上，在56 ℃条件下，用30 W紫外光管距标本4～6 cm的高度照射30 min，蒸馏水冲洗，经Giemsa染色后，显微镜下即可观察到姐妹染色单体的差别染色。
1.2.2SCE计数选择分散和差别染色良好、数目为46条染色体的第二代中期分裂细胞分析SCE，实验组每一实验点分析240个细胞、其他组每人分析20个细胞，在染色单体末端发生互换者记1次SCE，在中间互换者记2次，被判明在着丝点处互换者也计1次，各实验点结果以平均每细胞的SCE数和标准差表示 ......
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