芒果皮提取物的体外清除自由基作用研究(1)
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摘要：目的：对芒果皮提取物的体外清除自由基作用进行研究，为芒果皮的开发利用提供理论依据。方法：分别以水、95%乙醇和石油醚为溶剂提取芒果皮有效成分，再采用紫外-可见分光光度法研究芒果皮3种溶剂提取物对DPPH自由基、超氧阴离子自由基和羟自由基的清除作用。结果：芒果皮的水提取物、95%乙醇提取物和石油醚提取物对上述3种自由基均有很好的清除作用，并且清除率与样品浓度呈现一定的线性关系，浓度越高，清除作用越强；3种提取物对自由基的清除能力为95%乙醇提取物>水提取物>石油醚提取物。结论：芒果皮提取物对自由基有良好清除作用，在药品和保健品方面具有广阔的开发利用前景。
关键词：芒果皮；提取物；自由基；芒果
中图分类号：R284文献标识码：A
文章编号：1007-2349(2012)02-0050-03
芒果系漆树科芒果属植物芒果(Mangifera indical L.)的成熟果实，主产于热带、亚热带，是世界第二大热带水果，被誉为“热带水果之王”。在我国，芒果主要分布在云南(东南部)、贵州(南部)和广西(南部)三省，多为家养栽培，为当地的重要经济作物。研究表明，芒果果皮含有大量的黄酮[1]、山酮[1]、多糖[2]以及种类众多的小分子多酚类物质[3]，具有止咳化痰[4]、抗炎[4]、抑菌[5]、抗氧化[6]等作用。目前，芒果除鲜食外，主要被加工成饮料、罐头、果冻等，加工过程中产生的约占鲜果重量5%~10%的芒果皮则被抛弃，不仅浪费资源，而且污染环境。因此，如何利用废弃的芒果皮资源，进行开发利用，变废为宝，具有十分重要的意义。本文对芒果皮的水提取物、乙醇提取物和石油醚提取物的清除自由基活性进行研究，为芒果皮的科学开发利用提供理论依据。
1实验材料
1.1试剂与仪器AB204-N型电子天平(瑞士Mettler公司)；Shimadzu UV2401PC紫外可见分光光度仪(日本岛津公司)；HH-4数显恒温水浴锅(天津市恒温水浴锅厂)；LD-500刀片式粉碎机(长沙市岳麓区常宏制药机械设备厂)；PGX-330A-12H光照箱(宁波莱福科技有限公司)。核黄素(VB2)、氯化硝基四氮唑兰(NBT)，番红花红(Safranine T)，蛋氨酸，2，2-二苯基-1-苦肼基(DPPH)购自Sigma-Aldrich公司。乙醇、石油醚、二甲基亚砜(DMSO)为化学纯，购自昆明汕滇精细化学品有限公司；其它试剂均为分析纯，实验用水为二次蒸馏水。
1.2药材芒果，购自昆明水果市场。
2实验方法
2.1芒果皮提取物的制备取新鲜成熟芒果，自来水洗净，晾干，用水果刀均匀削取果皮，果皮厚度约1~5 mm。果皮置阳光下晒干，用刀片式粉碎机粉碎至20 mm以下。称取粉碎后的芒果皮3份，50 g/份，分别加入水、95%乙醇和石油醚500 mL，加热回流提取2 h，重复提取3次，提取液趁热过滤，过滤液合并，减压浓缩为浸膏，冷冻干燥，分别得到水提取物(EW)9.5 g，95%乙醇提取物(EEt)7.3 g和石油醚提取物(EP)3.8 g。取上述芒果皮的水提取物、95%乙醇提取物和石油醚提取物适量，以二甲基亚砜(DMSO)为溶剂，配制不同浓度的待测溶液，备用。
2.2DPPH自由基清除能力测定[7]DPPH用70%的乙醇配制成5×10~5 mol/L的溶液。取上述5×10~5 mol/L的DPPH溶液3.0 mL，加入2.1中不同浓度的待测试样溶液1.0 mL，于25 ℃反应15 min，用紫外-可见分光光度计于517 nm处测定吸光度值As；取5×10~5 mol/L的DPPH 3.0 mL，加入DMSO 1.0 mL，同法测定吸光度值A0。用70%乙醇3.0 mL+DMSO 1.0mL作参比溶液。取3次测试平均值，按下式计算清除率：
S(%)=[(A0-As)/ A0]× 100
2.3超氧阴离子自由基清除能力测定采用光照核黄素方法[8]。用pH 7.4的PSB缓冲液为溶剂，配制1.67×10~5 mol• L-1核黄素，0.01 mol•L-1蛋氨酸，4.6×10~5 mol•L-1氯化硝基四氮唑兰(NBT)。分别取上述3种溶液各2.0 mL，加入1.2.1中不同浓度的待测试样溶液1.0 mL，置光照箱中于4 500 lx下光照30 min，用紫外-可见分光光度计于560 nm处测定吸光度值As；同法，以1.0 mL DMSO代替样品溶液，测定吸光度值A0。用pH 7.4的PSB缓冲溶液6.0 mL +DMSO 1.0 mL作参比溶液。取3次测试平均值，按下式计算清除率：
S(%)=[(A0-As)/ A0]× 100
2.4羟自由基清除能力测定采用Fenton反应产生羟自由基使番红花红褪色的方法[9]。取pH 7.4的PSB缓冲溶液1.0 mL，40 μg/mL番红花红1.0 mL，0.945 mmol•L-1 EDTA-Fe(Ⅱ)(新鲜配制)1.0 mL，加入2.1中不同浓度的待测试样溶液0.5 mL，3% H2O2溶液1.0 mL(新鲜配制)，混合后在37℃水浴中反应30 min，用紫外-可见分光光度计在520 nm处测定吸光度As；同法，以0.5 mL DMSO代替样品溶液，测定吸光度A0；以0.5 mL DMSO代替样品溶液，以1.0 mL蒸馏水代替3 % H2O2溶液，测定吸光度A。用3.5 mL蒸馏水+PSB缓冲溶液1.0 mL作参比溶液。取3次测试平均值，按下式计算清除率：
S(%)=[(A0-As)/(A0 – A)]× 100
3实验结果与讨论
3.1对DPPH自由基的清除作用DPPH在有机溶剂中是一种稳定的自由基，其乙醇溶液显深紫色，在517 nm处有强吸收。当与抗自由基活性物质作用时，其孤对电子被配对，因而吸收消失或减弱，通过测定吸收减弱的程度，可评价自由基清除剂的活性。
芒果皮的水提取物(EW)、95%乙醇提取物(EEt)和石油醚提取物(EP)对DPPH自由基均有良好的清除作用，浓度越高，清除能力越强。通过回归分析，得EP的DPPH自由基清除率线性方程为y=10.6x+4.954 5，R2=0.954，IC50=4.25 μg/mL；EW线性方程为y=13 ......
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