袁 媛，黄 赫，甘 雨，王 菲

    (辽宁省中医药研究院，辽宁 沈阳 110034)

    实时荧光定量PCR检测黑参对S180荷瘤小鼠TNF-αmRNA表达的影响*

    袁 媛，黄 赫，甘 雨，王 菲

    (辽宁省中医药研究院，辽宁 沈阳 110034)

    目的 实时荧光定量PCR检测黑参对S180肿瘤模型小鼠TNF-αmRNA表达的影响，应用分子生物学手段分析黑参抑制肿瘤的机制。方法 采取腋下注射S180肿瘤细胞制得小鼠肿瘤模型，随机分成空白对照组、环磷酰胺组、消癌平组、红参高剂量组、红参中剂量组、红参低剂量组、黑参高剂量组、黑参中剂量组和黑参低剂量组。除空白对照组外，其他实验组均采取同时灌胃给药。测定小鼠给药前后体重、给药后瘤重，计算抑瘤率，利用IDTDNA设计引物，应用实时荧光定量PCR检测不同组TNF-α表达丰度。结果 与空白对照组相比，所有实验组肿瘤质量都有所减少。除消癌平和环磷酰胺外，使用高剂量黑参和低、中剂量红参对肿瘤重量的抑制较为显著(P1 实验材料

    1.1 肿瘤细胞和实验动物 S180肿瘤细胞购自上海；SPF级实验小鼠90 只，(21±3)g，购自辽宁长生生物技术有限公司，许可证号：SCXK(辽)2010-0001。

    1.2 实验药物 实验所用黑参和红参溶液为辽宁省中医药研究院科研制备。消癌平(南京圣和药业有限公司，批号：201304241)，刮去糖衣研成粉末待用；环磷酰胺(通化茂祥制药有限公司，批号：130201)，刮去糖衣研成粉末待用；红参购自辽宁省中医药研究院中药局；黑参按以往研究自制得到[2]。

    1.3 实验仪器 罗氏MPLC 2.0全自动核酸分离纯化系统(德国罗氏公司)；罗氏LC480实时荧光定量PCR仪(德国罗氏公司)；罗氏组织匀浆仪(德国罗氏公司)。

    1.4 实验试剂 罗氏RNA纯化试剂盒(组织用)货号03330591001；罗氏反转录第一链cDNA合成试剂盒货号04896866001；罗氏组织匀浆仪用锣盖管货号03358941001、罗氏SYBR GREEN染料货号04707516001；引物由本研究组设计，并由北京六合华大基因科技股份有限公司合成。

    2 实验方法

    2.1 构建S180荷瘤小鼠模型和给药 分组前称重 ......