大黄与伪品大黄的鉴定方法探究
摘要 目的：探讨大黄与伪品大黄的鉴定方法。方法：真品和伪品各25份，分别对实验样本进行性状鉴定、显微鉴定、荧光试验鉴定和薄层色谱鉴定，对比4种鉴定方法的鉴定准确率。结果：显微鉴定、荧光试验鉴定和薄层色谱鉴定方法准确率均明显高于性状鉴定(P<0.05)。结论：显微鉴定、荧光试验鉴定和薄层色谱鉴定均为大黄和伪品大黄的有效鉴定方法，性状鉴定方便、省时，但准确率较低。
关键词 大黄；伪品大黄；鉴定方法；鉴定准确率
资料与方法
实验样本：大黄50份，真品和伪品各25份，样本种类、采集地、数量，见表l。
方法：采用的鉴定方法包括性状鉴定、显微鉴定、荧光试验(理化鉴定)、薄层色谱鉴定。①性状鉴定：观察样本的外形，测量样本的长度，将样本横切开，观察横切面的颜色，再将根茎髓部起开，观察内部情况，嗅闻气味，咀嚼。②显微鉴定：使用显微成像系统(日本OLYMPUS)进行显微观察，先将样品横切，观察横切面情况，再将样品研成粉末，使用水合氯醛试液透化后，放置在显微镜下观察。③荧光试验：将样品研成粉末，精确称量0.2 g，置于干净的容器中，向容器中加入2 mL甲醇，加入10 min，放置在常规室温中冷却后，取10 uL上清液点于滤纸上，使用45%乙醇展开，晾干后，放置10 min，在365nm的波长紫外光灯下进行观察。④薄层色谱鉴定：精确称量正品大黄、伪品大黄粉末各lg，放置在洁净容器中，向容器中加入20 mL甲醇浸泡样品th，过滤，取5 mL滤液，蒸干，保留残渣。加水10 mL溶解残渣，再加入l mL盐酸，置于水浴箱中，60℃，30 min，常规室温中冷却。将样本分为2份，每份均使用乙醚进行萃取，合并两侧所得乙醚液，蒸干后，向残渣中加入氯仿进行溶解，总容积为l mL，作为供试品溶液。取芦荟大黄素和大黄酸作为对照品，向对照品中加甲醇，制作成对照品溶液(每l mL含lmg对照品)，精确称取12 g硅胶H，置于研钵中，再向研钵中加入42 mL 0.3%羟甲基纤维素钠溶液，充分研磨至糊状，置于面积为20 cm×20 cm的干净玻璃板上，使用洁净的工具涂匀，使其厚度保持在300 um左右，水平放置，常规室温中晾干，经105℃活化，时间30mm，置于干燥器皿中，制作成硅胶H-0.3%羟甲基纤维素钠板待用。取对照品溶液和供试品溶液5uL，点在同一个含有0.3%羟甲基纤维素钠硅胶H薄层板上，以20：25：5：2的比例向薄层板上滴加环己烷、醋酸乙酯、甲醇、醋酸作为展开剂，取出后晾干，在365 nm的波长紫外光灯下进行观察。
观察指标：对比性状鉴定、显微鉴定、荧光试验、薄层色谱鉴定4种鉴定方法的鉴定结果。
统计学方法：使用统计学软件SPSS18.0建立数据统计分析模型，计数资料的描述形式为百分率(%)，差异检验采用X2，P< 0.05为差异有统计学意义。
性状鉴定正品、伪品大黄判定标准：正品大黄大量为圆柱形、圆柱形或马蹄形，长度3 ～7 cm，表面呈棕黄色，有白色网状纹理，断面呈黄棕色，根茎髓部有异形维管束(星点)，并有层环纹形成。有清香气，味苦涩，咀嚼粘牙，有沙粒感，能将舌苔染成黄色，唾液也为黄色。伪品大黄形状不规则，多为扭曲状，长度多在5～13 cm，不如正品大黄粗壮，表明颜色较深，多为黄褐色，横断面为浅黄色，内部无星点，无清香气味，味苦。
显微鉴定正品、伪品大黄判定标准：正品大黄根茎横切面木栓层、皮层大多已去除，韧皮部射线较平直，能够容下多列细胞，内部有棕色物质，层环明显，木质部导管非木化，木质导管类圆，髓部宽广，有星点分布，薄壁细胞内可见淀粉粒和草酸钙簇晶。伪品大黄横切面偶尔可见残存的木栓层，射线较直和较窄，能容下l列细胞，环层不明显，髓部无星点，薄壁细胞内有较少的淀粉粒和草酸钙簇晶。
荧光试验正品、伪品大黄判定标准：正品大黄有棕色至棕红色荧光，伪品大黄呈亮蓝色和紫色荧光。
薄层色谱鉴定正品、伪品大黄判定标准：在365 nm波长的紫外光灯下观察，正品大黄可见芦荟大黄素和大黄酸，有橙红色斑点和2～3个蓝紫色荧光斑点，伪品大黄不含有芦荟大黄素、大黄酸两种代表性物质，无荧光斑点。
结果
4种鉴定方法中，薄层色谱的鉴定准确率最高，与显微鉴定结果和荧光试验鉴定结果比较，差异无统计学意义(P>0.05)，3种鉴定方法的鉴定准确率均明显高于性状鉴定，差异均有统计学意义(P<0.05)，见表2。
讨论
2010版《药典》中收载蓼科植物唐古特大黄、掌叶大黄或药用大黄的干燥根及根茎为正品大黄，除上述3种品种外，其余河套大黄、天山大黄的干燥根和根茎均被称为伪品大黄[1]。现代药理研究证实，大黄具有增强机体免疫功能、保肝利胆、抗炎等作用。如国内研究学者发现，大黄能够通过3种作用机制发挥调节机体免疫功能的作用，一是能够对内毒素诱生巨噬细胞的分泌功能产生影响[2]。二是大黄中的大黄素能够对细胞炎性因子白介素的表达产生抑制作用，保护血管内膜，增强机体免疫力。大黄具有的上述机制提示我们对大黄和伪品大黄进行鉴定十分必要。
本研究应用4种方法进行大黄和伪品大黄鉴定，结果显示薄层色谱鉴定结果的准确率最高，其次为显微鉴定和荧光试验，性状鉴定结果的准确率最低，其他3种鉴定方法的鉴定结果比较，差异无统计学意义。分析原因为性状鉴定主要通过肉眼观察和咀嚼，难以发现正品大黄和伪品大黄在结构上存在的差异。而荧光试验和显微鉴定恰好能弥补性状鉴定存在的不足。薄层色谱鉴定能够观察到正品大黄和伪品大黄的成分差异，故鉴定结果准确性更高，但鉴定操作相对复杂。
综上所述，对正品大黄和伪品大黄进行鉴定具有重要意义，在选择鉴定方法时，建议先选择操作简单的方法，当难以明确鉴定结果时，再选择鉴定结果准确率较高的方法，以最大程度地保障药效和患者的用药安全。
参考文献
[1]汪景荣，张卓勇，杨玉平，等.太赫兹时域光谱结合主成分分析线性判别和支持向量机用于大黄样品鉴定[J]光谱学與光谱分析，2017，37(5)：1606-1611.
[2]田晓轩，刘杰，窦永杰，等.中成药大黄蛰虫丸的宏条形码基原鉴定[J]天津中医药，2014，31(4)：234-237., 百拇医药(何雪梅)
关键词 大黄；伪品大黄；鉴定方法；鉴定准确率
资料与方法
实验样本：大黄50份，真品和伪品各25份，样本种类、采集地、数量，见表l。
方法：采用的鉴定方法包括性状鉴定、显微鉴定、荧光试验(理化鉴定)、薄层色谱鉴定。①性状鉴定：观察样本的外形，测量样本的长度，将样本横切开，观察横切面的颜色，再将根茎髓部起开，观察内部情况，嗅闻气味，咀嚼。②显微鉴定：使用显微成像系统(日本OLYMPUS)进行显微观察，先将样品横切，观察横切面情况，再将样品研成粉末，使用水合氯醛试液透化后，放置在显微镜下观察。③荧光试验：将样品研成粉末，精确称量0.2 g，置于干净的容器中，向容器中加入2 mL甲醇，加入10 min，放置在常规室温中冷却后，取10 uL上清液点于滤纸上，使用45%乙醇展开，晾干后，放置10 min，在365nm的波长紫外光灯下进行观察。④薄层色谱鉴定：精确称量正品大黄、伪品大黄粉末各lg，放置在洁净容器中，向容器中加入20 mL甲醇浸泡样品th，过滤，取5 mL滤液，蒸干，保留残渣。加水10 mL溶解残渣，再加入l mL盐酸，置于水浴箱中，60℃，30 min，常规室温中冷却。将样本分为2份，每份均使用乙醚进行萃取，合并两侧所得乙醚液，蒸干后，向残渣中加入氯仿进行溶解，总容积为l mL，作为供试品溶液。取芦荟大黄素和大黄酸作为对照品，向对照品中加甲醇，制作成对照品溶液(每l mL含lmg对照品)，精确称取12 g硅胶H，置于研钵中，再向研钵中加入42 mL 0.3%羟甲基纤维素钠溶液，充分研磨至糊状，置于面积为20 cm×20 cm的干净玻璃板上，使用洁净的工具涂匀，使其厚度保持在300 um左右，水平放置，常规室温中晾干，经105℃活化，时间30mm，置于干燥器皿中，制作成硅胶H-0.3%羟甲基纤维素钠板待用。取对照品溶液和供试品溶液5uL，点在同一个含有0.3%羟甲基纤维素钠硅胶H薄层板上，以20：25：5：2的比例向薄层板上滴加环己烷、醋酸乙酯、甲醇、醋酸作为展开剂，取出后晾干，在365 nm的波长紫外光灯下进行观察。
观察指标：对比性状鉴定、显微鉴定、荧光试验、薄层色谱鉴定4种鉴定方法的鉴定结果。
统计学方法：使用统计学软件SPSS18.0建立数据统计分析模型，计数资料的描述形式为百分率(%)，差异检验采用X2，P< 0.05为差异有统计学意义。
性状鉴定正品、伪品大黄判定标准：正品大黄大量为圆柱形、圆柱形或马蹄形，长度3 ～7 cm，表面呈棕黄色，有白色网状纹理，断面呈黄棕色，根茎髓部有异形维管束(星点)，并有层环纹形成。有清香气，味苦涩，咀嚼粘牙，有沙粒感，能将舌苔染成黄色，唾液也为黄色。伪品大黄形状不规则，多为扭曲状，长度多在5～13 cm，不如正品大黄粗壮，表明颜色较深，多为黄褐色，横断面为浅黄色，内部无星点，无清香气味，味苦。
显微鉴定正品、伪品大黄判定标准：正品大黄根茎横切面木栓层、皮层大多已去除，韧皮部射线较平直，能够容下多列细胞，内部有棕色物质，层环明显，木质部导管非木化，木质导管类圆，髓部宽广，有星点分布，薄壁细胞内可见淀粉粒和草酸钙簇晶。伪品大黄横切面偶尔可见残存的木栓层，射线较直和较窄，能容下l列细胞，环层不明显，髓部无星点，薄壁细胞内有较少的淀粉粒和草酸钙簇晶。
荧光试验正品、伪品大黄判定标准：正品大黄有棕色至棕红色荧光，伪品大黄呈亮蓝色和紫色荧光。
薄层色谱鉴定正品、伪品大黄判定标准：在365 nm波长的紫外光灯下观察，正品大黄可见芦荟大黄素和大黄酸，有橙红色斑点和2～3个蓝紫色荧光斑点，伪品大黄不含有芦荟大黄素、大黄酸两种代表性物质，无荧光斑点。
结果
4种鉴定方法中，薄层色谱的鉴定准确率最高，与显微鉴定结果和荧光试验鉴定结果比较，差异无统计学意义(P>0.05)，3种鉴定方法的鉴定准确率均明显高于性状鉴定，差异均有统计学意义(P<0.05)，见表2。
讨论
2010版《药典》中收载蓼科植物唐古特大黄、掌叶大黄或药用大黄的干燥根及根茎为正品大黄，除上述3种品种外，其余河套大黄、天山大黄的干燥根和根茎均被称为伪品大黄[1]。现代药理研究证实，大黄具有增强机体免疫功能、保肝利胆、抗炎等作用。如国内研究学者发现，大黄能够通过3种作用机制发挥调节机体免疫功能的作用，一是能够对内毒素诱生巨噬细胞的分泌功能产生影响[2]。二是大黄中的大黄素能够对细胞炎性因子白介素的表达产生抑制作用，保护血管内膜，增强机体免疫力。大黄具有的上述机制提示我们对大黄和伪品大黄进行鉴定十分必要。
本研究应用4种方法进行大黄和伪品大黄鉴定，结果显示薄层色谱鉴定结果的准确率最高，其次为显微鉴定和荧光试验，性状鉴定结果的准确率最低，其他3种鉴定方法的鉴定结果比较，差异无统计学意义。分析原因为性状鉴定主要通过肉眼观察和咀嚼，难以发现正品大黄和伪品大黄在结构上存在的差异。而荧光试验和显微鉴定恰好能弥补性状鉴定存在的不足。薄层色谱鉴定能够观察到正品大黄和伪品大黄的成分差异，故鉴定结果准确性更高，但鉴定操作相对复杂。
综上所述，对正品大黄和伪品大黄进行鉴定具有重要意义，在选择鉴定方法时，建议先选择操作简单的方法，当难以明确鉴定结果时，再选择鉴定结果准确率较高的方法，以最大程度地保障药效和患者的用药安全。
参考文献
[1]汪景荣，张卓勇，杨玉平，等.太赫兹时域光谱结合主成分分析线性判别和支持向量机用于大黄样品鉴定[J]光谱学與光谱分析，2017，37(5)：1606-1611.
[2]田晓轩，刘杰，窦永杰，等.中成药大黄蛰虫丸的宏条形码基原鉴定[J]天津中医药，2014，31(4)：234-237., 百拇医药(何雪梅)