云南红豆杉紫杉烯合成酶基因克隆、序列分析与植物表达载体的构建
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梁素钰 和丽岗 郑学勤 中国热带农业科学院热带生物技术研究所热带作物生物技术国家重点实验室 云南省热带作物科学研究所 中国热带农业科学院热带生物技术研究所热带作物生物技术国家重点实验室
【摘要】利用分段RT-PCR法成功地从云南红豆杉叶片总RNA中分离出两条长约1.4kb和1.5kb的cDNA片段,克隆到pUCm-T载体中,序列拼接分析表明,该cDNA片段与WildungMR等发表的紫杉二烯合成酶基因编码区2586bp有41个核苷酸不同,同源性为98.42%,具有编码862个氨基酸蛋白质的能力.为了检测所克隆的基因编码产物是否具有活性,并进一步制备抗体以便于将来转基因植物的检测,构建了一个酵母表达载体GAPA-T14;为了转化植物构建了两个具有不同启动子的植物表达载体,pBI121-T14(含35S启动子)和pBIH-T14(在pBI121的基础上以胶乳特异启动子取代35S启动子).
【关键词】 云南红豆杉 紫杉烯合成酶 植物表达载体 cDNA克隆 紫杉醇
【分类号】S567.1
紫杉醇(Taxol)是Wani等人[1]1971年首次从短叶红豆杉(TaxusbrevifoliaNutt.)树皮中分离到的具有独特抗癌作用的天然产物化合物(药品名Paclitaxel),1992年12月FDA(美国食品医药管理局)正式批准用于临床治疗其他抗癌药无效的晚期卵巢癌.现在市场上供应的紫杉醇主要从红豆杉树皮
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摘 要：利用分段RT-PCR法成功地从云南红豆杉叶片总RNA中分离出两条长约1.4kb和1.5kb的cDNA片段，克隆到pUCm-T载体中，序列拼接分析表明，该cDNA片段与Wildung M R 等发表的紫杉三烯合成酶基因编码区2568bp有41个核苷酸不同，同源性为98.42%，具有编码862个氨基酸蛋白质的能力。为了检测所克隆的基因编码产物是否具有活性，并进一步制备抗体以便于将来转基因植物的检测，构建了一个酵母表达载体GAPA-T14；为了转化植物构建了两个具有不同启动子的植物表达载体，PBI121-T14(含35S启动子)和pBIH-T14(在pBI121的基础上以胶乳特异启动子)。
关键词：云南红豆杉；紫杉烯合成酶；植物表达载体；cDNA克隆；紫杉酶
中图分类号：Q78
文献标识码：A
文章编号：1007-7847(2005)01-0024-05
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