人LXR-LBD原核表达载体的构建及其在E.Coli中的表达
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巩艳 叶治家 曹廷兵 彭家和 江渝 第三军医大学西南医院消化科 第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室 第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室 第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室 第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室
【摘要】从正常中国人的肝脏组织分离总RNA,采用RT-PCR获得人的LXR-LBDcDNA,然后克隆至原核表达载体pET28a,构建高效原核表达质粒pET28a-LXR-LBD,序列分析表明正常中国人的LXR-LBDcDNA序列与GeneBank报道的序列一致.把构建的pET28a-LXR-LBD质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG进行诱导表达,Westernblot检测表达产物,在相对分子质量35kD处有特异的蛋白表达条带,表达蛋白以可溶性和包涵体方式存在.在N末端融合6×His纯化标签的表达产物用Ni2+-NTA离子交换树脂进行纯化,纯化蛋白进行SDS-PAGE纯度分析大于90%以上.
【关键词】 LXR LXR-LBD 克隆 表达
【基金】国家自然科学基金资助项目(30070358) 重庆市科技攻关项目(200126)
【分类号】Q786
孤儿受体肝脏X受体(liverXreceptors,LXR)基因是从肝脏cDNA文库分离获得的并在肝脏高水平表达.LXR亚家族包括LXRα(NR1H3)和LXRβ(NR1H2)[1].LXRα主要表达在脂代谢有关的组织,如肝脏、小肠;LXRβ在多种组织有低水平表达.LXRα、LXRβ与维甲酸X受体(retinoidXreceptor,RXR)形
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摘 要：从正常中国人的肝脏组织分离总RNA，采用RT-PCR获得人的LXR-LBD cDNA，然后克隆至原核表达载体pET28a，构建高效原核表达质粒pET28a-LXR-LBD，序列分析表明正常中国人的LXR-LBD cDNA序列与Gene Bank报道的序列一致。把构建的pET28a-LXR-LBD质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)，IPTG进行诱导表达，Western blot检测表达产物，在相对分子质量35kD处有特异的蛋白表达条带，表达蛋白以可溶性和包涵体方式存在。在N末端融合6×His纯化标签的表达产物用Ni2+-NTA离子交换树脂进行纯化，纯化蛋白进行DSD-PAGE纯度分析大于90%以上。
关键词：LXR；LXR-LBD；克隆；表达
中图分类号：Q786
文献标识码：A
文章编号：1007-7847(2005)01-0033-05
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