化学致癌物DNP致人胚鼻咽上皮细胞转化相关基因的鉴定
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段朝军 关勇军 何春梅 李峰 肖志强 陈主初 中南大学湘雅医院医学实验中心 中南大学肿瘤研究所 中南大学肿瘤研究所 中南大学肿瘤研究所 中南大学湘雅医院医学实验中心 中南大学湘雅医院医学实验中心
【摘要】为了探讨DNP致癌的分子机理,鉴定出化学致癌物二亚硝基哌嗪(DNP)致人胚鼻咽上皮细胞转化相关的基因及其活化方式.采用DNA共转染、裸鼠致瘤性试验、Southern杂交、PCR测序和序列同源性比较分析等,对DNP转化的人胚鼻咽上皮细胞株HENE-DNP进行研究.经过两轮DNA共转染和裸鼠致瘤性实验,Southern杂交表明,裸鼠肿瘤DNA中均含有人特异性高度重复序列Alu.用人Ha-ras、Ki-ras及N-ras癌基因特异性引物对裸鼠肿瘤DNA进行PCR扩增,仅能扩增出人Ha-ras基因相应的片段.Southern杂交进一步证实,裸鼠肿瘤DNA中存在与人Ha-ras基因片段大小一致的杂交带.RT-PCR产物测序,并将测序结果与GenBank进行序列同源性比较分析,发现裸鼠肿瘤中人Ha-ras基因cDNA第26位密码子第2位碱基发生了T→C的转换,编码的氨基酸由亮氨酸相应地变换成丝氨酸.化学致癌物DNP致人胚鼻咽上皮细胞转化相关的基因是Ha-ras,原癌基因c-Ha-ras激活可能是DNP转化人胚鼻咽上皮细胞的分子机制之一.
【关键词】 二亚硝基哌嗪 共转染 转化基因或癌基因
【基金】国家自然科学基金资助项目(39470777) 国家自然科学基金资助项目(3977064)
【分类号】R739.63
鼻咽癌是我国南方常见的恶性肿瘤之一,其病因发病学一直是人们研究的热点.研究表明鼻咽癌的发生与化学致癌物、EB病毒及遗传因素密切相关.化学致癌物二亚硝基哌嗪(DNP)皮下注射大鼠可诱发高频率的鼻咽癌,并表现出器官特异性和组织特异性[1].作者所在的实验室曾用DNP体外转化
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摘 要：为了探讨DNP致癌的分子机理，鉴定出化学致癌物二亚硝基哌嗪(DNP)致人胚鼻咽上皮细胞转化相关的基因及其活化方式。采用DNA共转染、裸鼠致瘤性试验、Southern杂交、PCR测序和序列同源性比较分析等，对DNP转化的人胚鼻咽上上皮细胞株HENE-DNP进行研究。经过两轮DNA共转染和裸鼠致瘤性实验，Southern杂交表明，裸鼠肿瘤DNA中均含有人特异性高度重复序列Alu。用人Ha-ras、Ki-ras及N-ras癌基因特异性引物对裸鼠肿瘤DNA进行PCR扩增，仅能扩增出人Ha-ras基因相应的片段。Southern杂交进一步证实，裸鼠肿瘤DNA中存在与人Ha-ras基因片段大小一致的杂效带。RT-PCR产物测序，并将测序结果与GenBank进行序列同源性比较分析，发现裸鼠肿瘤中人Ha-ras基因cDNA第26位密码子第2位碱基发生了T→C的转换，编码的氨基酸由亮氨酸相应地变换成丝氨酸。化学致癌物DNP致人胚鼻咽上皮细胞转化相关的基因是Ha-ras，原癌基因c-Ha-ras激活可能是DNP转化人胚鼻咽上皮细胞的分子机制之一。
关键词：二亚硝基哌嗪；共转染；转化基因或癌基因
中图分类号：R392
文献标识码：A
文章编号：1007-7847(2005)01-0084-06
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