应用小鼠整体原位杂交技术检测MDM2在鼠胚发育不同阶段的表达(2)
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100mg/LHeparin)60℃水浴3次,每次1h;换含约1mg/LMDM2RNA探针的杂交液(成份同预杂交液)1mL;65℃杂交过夜。
1.2.5 终止杂交,抗体孵育和显色
用预热的杂交液65℃漂洗30min;预热的溶液1(50% frmamide/1XSSC/0.1%Tween 20新鲜配制)漂洗2次,每次1h;溶液1/MABT按1:1的比例(含100mmol/L maleic acid,150mmol/LNacl,0.1% Tween20)室温漂洗30min;MABT漂洗4次,每次30min;MABT/2%BBR室温漂洗1h;2mL新鲜MABT/2%BBR/20%封闭用绵羊血清,室温孵育1h;MABT/2%BBR/20%封闭用绵羊血清/抗地高辛抗体,4℃孵育过夜,E7-9的抗体滴度为1/2000,E10为1/5000。
1.2.6 终止显色,固定照相
依次以MABT(含100 mmol/L maleic acid,150mmol/LNaCl,0.1%Tween 20)漂洗10次,前4次15 min,后4次30min,最后二次1h,碱性磷酸酶溶液(100mmol/LTrispH 9.5,50mmol/LMgCl2,100 mmol/L NaCl,0.1%Tween 20,5mmol/L左旋咪唑)漂洗3次(室温) ......
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