携带大片段BIBAC克隆在不同农杆菌中的遗传稳定性研究
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邢俊杰 杨剑 梁铃 李强 李磊 张朝良 杲修杰 曹筑荣 曹孟良 国家杂交水稻工程技术研究中心 国家杂交水稻工程技术研究中心 国家杂交水稻工程技术研究中心 国家杂交水稻工程技术研究中心 国家杂交水稻工程技术研究中心 国家杂交水稻工程技术研究中心 国家杂交水稻工程技术研究中心 国家杂交水稻工程技术研究中心 国家杂交水稻工程技术研究中心
【摘要】大片段克隆在农杆菌中的稳定性是利用可转化大片段载体进行农杆菌介导遗传转化的关键问题.选用插入片段分子质量分别为150kb和50kb的BIBAC克隆,测定了在3种农杆菌AGL-1,EHA105和LBA4404中的遗传稳定性.从第1、3、5次继代培养的农杆菌中抽提的质粒及酶切结果显示,由于农杆菌背景质粒的干扰,难以判断质粒的降解与否.将农杆菌质粒再转化到大肠杆菌宿主中,发现来自农杆菌AGL-1和EHA105的质粒出现了明显的降解,片段变小,而来自农杆菌LBA4404的质粒没有变化.结果表明,大片段BIBAC质粒在不同农杆菌菌株中的稳定性不同,在农杆菌LBA4404中比较稳定,适合用于遗传转化.
【关键词】 大片段基因文库 根癌农杆菌 遗传稳定性
【基金】中国博士后基金项目(2005037696)
【分类号】Q78
可转化大片段克隆载体主要设计用于图位克隆中大片段克隆的功能补偿鉴定,避免亚克隆的繁琐步骤,主要有BIBAC[1]和TAC[2]两种载体.但据报道,大片段BIBAC/TAC克隆在宿主大肠杆菌中是稳定的,而在农杆菌中稳定性差,特别是片段大的克隆,常由于降解而导致片段变小[3].选择两种分子
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摘要：大片段克隆在农杆菌中的稳定性是利用可转化大片段载体进行农杆菌介导遗传转化的关键问题。选用插入片段分子质量分6.1为150kb和50kb的BIBAC克隆，测定了在3种农杆菌AGL-1，EHA105和LBA4404中的遗传稳定性。从第1、3、5次继代培养的农杆菌中抽提的质粒及酶切结果显示，由于农杆菌背景质粒的干扰，难以判断质粒的降解与否。将农杆菌质粒再转化到大肠杆菌宿主中，发现来自农杆菌ACL-1和EHA105的质粒出现了明显的降解，片段变小，而来自农杆菌LBA4404的质粒没有变化。结果表明，大片段BIBAC质粒在不同农杆菌菌株中的稳定性不同，在农杆菌LBA4404中比较稳定，适合用于遗传转化。
关键词：大片段基因文库；根癌农杆菌；遗传稳定性
中图分类号：Q75
文献标识码：A
文章编号：1007-7847(2006)04—0291-04
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