詹氏甲烷球菌DNA连接酶在大肠杆菌中的表达纯化及连接活性鉴定
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张洋 谢响明 刘建华 北京林业大学生物科学与技术学院;上海交通大学生物科学与技术学院;
【摘要】对一种耐热性古菌——詹氏甲烷球菌(Methanocaldococcus jannaschii)的DNA连接酶进行了克隆、表达、纯化,并对其生物化学特性和酶学活性进行了初步研究.詹氏甲烷球菌DNA连接酶重组蛋白在ATP及Mg2+二价阳离子存在的条件下具有连接酶活性,能够封闭DNA链上的切割.通过不同温度下的测试,50~80℃为较适合连接温度,其耐热性强,甚至在90℃下加热5min后仍有连接酶活性;其发挥活性的pH值范围比较宽泛,最适pH值为6.0~9.0.这是国际上对詹氏甲烷球菌DNA连接酶的首次报导.
【关键词】 詹氏甲烷球菌 DNA连接酶 蛋白纯化 酶活分析
【分类号】Q78
DNA复制重组和修复直接影响着生物体遗传和变异.对生活在较高温度下的超嗜热菌而言,其基因组DNA较容易受到损伤[1].但是超嗜热菌的变异率却与其他生长在温和环境中的生物一致,这说明超嗜热菌的DNA修复机制比常温生物更为高效.在已完成基因组测序的超嗜热古菌中并没有发现细菌
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摘要：对一种耐热性古茵——詹氏甲烷球茼(Methanocaldococetis jennaschii)的DNA连接酶进行了克隆、表达、纯化，并对其生物化学特性和酶学活性进行了初步研究.詹氏甲烷球菌DNA连接酶重组蛋白在ATP及Ma2+二价阳离子存在的条件下具有连接酶活性，能够封闭DNA链上的切割.通过不同温度下的测试，50～80℃为较适合连接温度，其耐热性强，甚至在90℃下加热5 min后仍有连接酶活性；其发挥活性的pH值范围比较宽泛，最适pH值为6.0～9.0.这是国际上对詹氏甲烷球菌DNA连接晦的首次报导。
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