豆豉纤溶酶基因在大肠杆菌中的可溶性表达及纯化

http://www.100md.com 2010年9月1日 张少平 陈 亮 郭 勇

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     摘要：豆豉纤溶酶是从豆豉中发现的新型纤溶酶，从枯草杆菌DC-12中提取总DNA，PCR法扩增pro-DFE基因，将pro-DFE基因插入载体pET-32a，构建表达质粒pET-pro-DFE，转化大肠杆菌BL21(DE3)，对重组菌株进行变温诱导表达，重组菌株于37℃培养至OD₆₀₀为0.6时，加入终浓度为0.4mmol/L的IPTG于24℃进行诱导，SDS-PAGE显示可溶性重组融合蛋白约占重组蛋白的60%，且少量融合重组蛋白发生自切割。形成成熟的豆豉纤溶酶，破菌上清中含有成熟的豆豉溶栓酶，纤溶活性为200IU/mL重组酶经纯化后比酶活为1280IU/mg。

    关键词：豆豉纤溶酶；可溶性表达；纯化；大肠杆菌

    中图分类号：Q786 文献标识码：A 文章编号：1007-7847(2010)03-0208-05

    http://www.100md.com/html/paper/1007-7847/2010/03/05.htm

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