基于果蝇DNA甲基化的AFLP体系的建立及优化
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2011年1月1日
黑腹果蝇,扩增片段长度多态性(AFLP),体系优化
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参见附件。
郭欣欣 毛雪 张敏 陕西师范大学生命科学学院;
【摘要】以黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)Canton-S品系为材料,采用改良SDS法提取高质量DNA,对连接、预扩增及选择性扩增进行分析,建立适用于果蝇基因组DNA甲基化多态性研究的AFLP优化体系:1)10μL连接体系加T4连接酶1 U,AluⅠ接头50 pmol,EcoR Ⅰ接头5 pmol,4℃反应12 h;2)25μL预扩增体系含Mg2+0.2 mmol/L,dNTPs 0.15 mmol/L,模板1.0μL,Taq DNA聚合酶2 U,E-00 50 ng,A-00 50 ng;3)25μL选择性扩增体系含Mg2+0.1 mmol/L,dNTPs 0.15 mmol/L,模板2.0μL,Taq DNA酶1.5 U、E+340 ng,A+3 40 ng.该体系稳定性高、重复性好,适用于果蝇基因组DNA甲基化多态性研究.
【关键词】 黑腹果蝇 扩增片段长度多态性(AFLP) 体系优化
【基金】中央高校基本科研业务费专项资金资助项目(GK201002042)
【分类号】Q341
DNA甲基化广泛存在于细菌、植物和高等动物中,是表观遗传研究最为深入的一种形式,其调节一些重要的生物学功能,包括胚胎正常发育、染色体结构的维持、X染色体失活、基因组印记、基因表达沉默等,是近年表观遗传学的研究热点之一[1,2].目前,用于分析DNA甲基化的方法较多,甲基化
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