靶向抑制miRNA-21提高白血病K562细胞对阿糖胞苷的敏感性
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2011年4月1日
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朱雪姣 李育敏 谷景义 郭敏 费嘉 暨南大学医学院生物化学与分子生物学教研室;广西壮族自治区民族医院;暨南大学医学院血液病研究所;
【摘要】为研究以miRNA-21为靶标的反义核酸(AMO-miR-21)提高白血病K562细胞对阿糖胞苷(Ara-C)的敏感性及可能的作用机制,在LipofectamineTM2000介导下,将化学合成的AMO-miR-21转染K562细胞,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测单独使用AMO-miR-21、Ara-C以及两者联合使用对细胞增殖抑制作用,并计算抑制率和IC50;流式细胞仪检测细胞凋亡;实时定量PCR(Real-time PCR)检测miRNA-21及其候选靶基因Pdcd4 mRNA的表达水平;免疫印迹(Western blot)检测Pdcd4蛋白的表达水平.结果显示Ara-C与AMO-miR-21联合使用后,IC50从1.95μmol/L降低到0.84μmol/L,敏感性提高到单用Ara-C的2.3倍.AMO-miR-21联合Ara-C组细胞凋亡明显增加(P0.05).AMO-miR-21显著抑制K562细胞中miRNA-21的表达水平(P0.05),同时Pdcd4的表达明显增加(P0.05).提示AMO-miR-21可以提高K562细胞对Ara-C的敏感性,其作用机制与靶向抑制miRNA-21,进而诱导细胞凋亡有关.
【关键词】 miRNA- 反义寡核苷酸 阿糖胞苷 K细胞 化疗敏感性
【基金】暨南大学科研培育与创新基金前瞻性与基础研究项目(11609406),暨南大学研究生精品课程(医学分子生物学)建设项目(50623021)
【分类号】R733.7
慢性粒细胞性白血病(chronic myeloidleukemia,CML)是一种起源于多能造血干细胞的恶性增殖性疾病,约占成年人白血病的20%～30%,年发病率为1/105,在我国白血病中发病率仅次于急粒和急淋而居第3位,近年CML发病率有明显增加之趋势,已日益成为威胁人民健康的一种常见恶性肿瘤.目前
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