厚荚相思RNA提取方法的建立与优化
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2012年4月1日
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姚冬琳 刘伟娜 杨明嘉 郭惠红 金一 谢响明 北京林业大学生物科学与技术学院;中国科学院生态环境研究中心;
【摘要】针对厚荚相思叶片中单宁、酚类、色素、纤维素多糖物质含量高的特点,对Trizol法、改良的热硼酸盐法、CTAB(hexadecyl trimethy ammonium bromide)法和超声波破碎结合RNA提取试剂盒法从厚荚相思体外培养的叶片中提取总RNA进行比较研究,结果表明:在RNA提取试剂盒的基础之上,引入20 MHz的超声波,破碎2 min(puls on 5 s,puls off 5 s)为假叶RNA提取的优化方法.运用此方案获得的RNA片段较完整,其A260/A280值均在1.82～1.98之间,并成功进行了基因片段的RT-PCR(reverse transcription PCR).
【关键词】 厚荚相思 RNA提取 方法优化
【基金】国家自然科学基金资助项目(31070635) 北京林业大学青年科技启动基金资助项目(BLX006)
【分类号】Q943
RNA分离不仅是基因表达分析研究的第一步,也是基因遗传改良的重要基础[1].在进行North-ern杂交分析、基因体外翻译、cDNA文库构建、cDNA末端快速扩增(rapid amplification of cDNAends,RACE)、差异显示反转录PCR(differentialdisplay reverse transcription-PCR,DDRT-PCR)等
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