人孤雌胚胎干细胞在人包皮成纤维细胞饲养层上的生长状态
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2012年4月1日
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王志强 梁锐 陈明清 董坚 邓俊 陈天星 李文亮 文政琦 昆明医科大学第一附属医院肿瘤科;云南省第一人民医院病理科;昆明医科大学第一附属医肿瘤科;昆明医科大学第一附属医院男性科;
【摘要】人孤雌胚胎干细胞(human parthenogenetic embryonic stem cells,hPESCs)体外培养常需饲养层的支持以保持干细胞特性.通过原代培养获得人包皮成纤维细胞(human foreskin fibroblasts,hFFs)并将其制备成饲养层,使hPESCs在hFFs上进行体外培养及传代.倒置显微镜下观察hPESCs的生长状态,采用碱性磷酸酶(alkalinephosphatase,AKP)检测、核型分析和体内分化实验研究hPESCs的生物学特性及分化潜能,以探索hFFs能否长期支持hPESCs的生长并维持其未分化状态.经原代培养成功获得了hFFs,通过形态学观察和免疫细胞化学染色鉴定符合成纤维细胞的生物学特性;在hFFs上生长的hPESCs克隆形态规则,不易分化;已成功在体外培养20余代,hPESCs仍能够保持基本生物学特性和正常核型,在裸鼠体内可形成含有3个胚层组织成分的畸胎瘤.作为人源性饲养层,hFFs可长期支持hPESCs的生长并维持其未分化状态.
【关键词】 人孤雌胚胎干细胞 人包皮成纤维细胞 饲养层 人胚胎干细胞 细胞培养
【分类号】R329.2
孤雌生殖是指有性生殖动物处于第二次减数分裂中期(MⅡ期)的卵母细胞不经过精子受精作用而被激活,并进行有丝分裂获得早期胚胎发育的无性生殖过程[1].孤雌生殖在低等生物中是一种常见的繁殖现象,而哺乳动物需要通过人工孤雌激活来实现.卵母细胞人工孤雌激活后获得的囊胚称为
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