流感病毒NS1蛋白稳定表达的A549细胞系建立
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2013年1月1日
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李志辉 曾琳姣 王慧煜 梅琳 刘永飞 韩雪清 中国检验检疫科学研究院;天津大学化工学院;
【摘要】A型流感病毒的NS1(Nonstructurol 1 protein,NS1)蛋白是病毒复制、毒力等的重要调节蛋白.运用RT-PCR方法扩增A/Beijing/501/2009(H1N1)流感病毒NS1基因,克隆至真核表达载体pCMV-HA,用Lipofectamine2000将线性化pCMV-HA-NS1与neo基因共同转染A549细胞,通过G418筛选获得阳性重组细胞,并采用PCR、RT-PCR、Western blot技术检测重组细胞中NS1蛋白的表达,通过免疫荧光技术观察NS1蛋白在细胞中的定位.PCR、RT-PCR检测显示NS1基因成功整合进入细胞基因组,并转录为mRNA;Western blot检测显示重组细胞系稳定表达NS1蛋白,免疫荧光显示NS1蛋白定位于细胞核内.表明通过G418筛选,成功构建稳定表达NS1蛋白的重组A549-HA-NS1细胞系,且NS1蛋白定位于细胞核内,为进一步研究NS1蛋白的生物学功能奠定基础.
【关键词】 A型流感病毒 NS蛋白 A细胞系 稳定表达
【基金】中国检验检疫科学研究院基本科研业务费专项项目资助(2011JK004) 国家重点基础研究发展计划(2011CB504704)资助项目
【分类号】Q939.4
2009年3月底,A H1N1流感开始在墨西哥和美国加利福尼亚州、德克萨斯州爆发,至2010年1月17日全球209个国家有实验室报告发现有甲型H1N1流感感染病例,感染人数达1 311522,死亡病例达14 142例.流感病毒属于正黏病毒科,能够引起禽类、人和其他哺乳动物急性呼吸道感染[1],其基因组
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