稳定表达牛催乳素基因的小鼠乳腺上皮细胞系的建立
参见附件。
HCll细胞系由Ball等于1988年分离得到，作为一个小鼠乳腺上皮细胞系，HCll细胞系是体外研究乳腺特异基因表达的良好模型。
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方彧聃 何佳平 张斯敏 王娟 任晓叶 张金脉 张敬之 上海市儿童医院上海交通大学附属儿童医院;上海交通大学医学遗传研究所;卫生部医学胚胎分子生物学重点实验室暨上海市胚胎与生殖工程重点实验室;
【摘要】在乳腺上皮细胞体外培养时,为了使其状态接近泌乳期,需要在培养基中添加催乳素.由于催乳素价格昂贵,使得乳腺上皮细胞的体外培养成本颇高.建立在体外培养过程中不需要添加催乳素蛋白的乳腺上皮细胞系,能为在细胞水平研究乳腺细胞相关基因提供诸多方便.利用慢病毒载体的整合特性,建立稳定整合了牛催乳素cDNA(bPRL)表达盒的小鼠乳腺上皮细胞系(HC11细胞系).经10代次以上的传代以后,通过定量PCR检测,证明平均每个细胞中含有2.6个外源的bPRL基因,其表达量为HC11细胞中管家基因β-肌动蛋白(β-actin)表达量的14%左右.另外,先前的研究结果表明催乳素能在HC11和泌乳期的小鼠乳腺上皮组织中有效促进山羊β-酪蛋白启动子启动外源基因的表达.之后的实验证实整合了催乳素基因的HC11细胞(bPRL-HC11细胞系)也有此功能.因此,bPRL-HC11细胞系可以为体外研究乳腺生物反应器提供良好的细胞模型.
【关键词】 HC细胞系 催乳素 慢病毒载体 乳腺特异性基因 乳腺生物反应器
【基金】国家自然科学基金资助项目(81271690) 国家重点基础研究发展计划(973计划)项目(2010CB945202) 上海市自然科学基金资助项目(11ZR1429900)
【分类号】Q813
HC11细胞系由Ball等[1,2]于1988年分离得到.作为一个小鼠乳腺上皮细胞系,HC11细胞系是体外研究乳腺特异基因表达的良好模型.在催乳素的诱导下,HC11细胞系显示出其泌乳期的一些特征[3～5].然而,催乳素价格昂贵.2012年,Sigma公司的鼠源催乳素价格为3 000元人民币每50μg蛋白.这
HCll细胞系由Ball等于1988年分离得到，作为一个小鼠乳腺上皮细胞系，HCll细胞系是体外研究乳腺特异基因表达的良好模型。
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方彧聃 何佳平 张斯敏 王娟 任晓叶 张金脉 张敬之 上海市儿童医院上海交通大学附属儿童医院;上海交通大学医学遗传研究所;卫生部医学胚胎分子生物学重点实验室暨上海市胚胎与生殖工程重点实验室;
【摘要】在乳腺上皮细胞体外培养时,为了使其状态接近泌乳期,需要在培养基中添加催乳素.由于催乳素价格昂贵,使得乳腺上皮细胞的体外培养成本颇高.建立在体外培养过程中不需要添加催乳素蛋白的乳腺上皮细胞系,能为在细胞水平研究乳腺细胞相关基因提供诸多方便.利用慢病毒载体的整合特性,建立稳定整合了牛催乳素cDNA(bPRL)表达盒的小鼠乳腺上皮细胞系(HC11细胞系).经10代次以上的传代以后,通过定量PCR检测,证明平均每个细胞中含有2.6个外源的bPRL基因,其表达量为HC11细胞中管家基因β-肌动蛋白(β-actin)表达量的14%左右.另外,先前的研究结果表明催乳素能在HC11和泌乳期的小鼠乳腺上皮组织中有效促进山羊β-酪蛋白启动子启动外源基因的表达.之后的实验证实整合了催乳素基因的HC11细胞(bPRL-HC11细胞系)也有此功能.因此,bPRL-HC11细胞系可以为体外研究乳腺生物反应器提供良好的细胞模型.
【关键词】 HC细胞系 催乳素 慢病毒载体 乳腺特异性基因 乳腺生物反应器
【基金】国家自然科学基金资助项目(81271690) 国家重点基础研究发展计划(973计划)项目(2010CB945202) 上海市自然科学基金资助项目(11ZR1429900)
【分类号】Q813
HC11细胞系由Ball等[1,2]于1988年分离得到.作为一个小鼠乳腺上皮细胞系,HC11细胞系是体外研究乳腺特异基因表达的良好模型.在催乳素的诱导下,HC11细胞系显示出其泌乳期的一些特征[3～5].然而,催乳素价格昂贵.2012年,Sigma公司的鼠源催乳素价格为3 000元人民币每50μg蛋白.这
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