麦氏安瘿蜂体内侵染Wolbachia的WO噬菌体的检测及其orf7基因序列分析(2)
1.3WO的orf7基因片段的PCR扩增及检测扩增WO噬菌体orf7基因(WO噬菌体编码衣壳蛋白基因)的特异性引物序列是:WO-F:5'-CCCACATGACCAATGACGTCTG-3'和WO-R:5'-CGTTCGCTCTGCAAGTAACTCCATTAAAAC-3',PCR反应体系为25μL包括:14.8μL H2O,2.5μLlOxbuffer,2μL dNTPs,2.5μL MgCl2(25mmol/L),0.2μL Taq DNA polymerase(lU),上下游引物各0.5μL和2μL DNA模板。PCR反应程序:94℃3min;94℃ 30s,66℃ 30s,72℃ 30s,30个循环;最后72℃延伸5min。
取扩增产物5μL点样于1.0%的琼脂糖凝胶,置于o.5xTBE缓冲液中电泳,在70V条件下电泳45min。电泳完成后用溴化乙锭染色,凝胶成像系统检测。
1.4orf7基因片段的测序及分析
将目的基因片段的PCR产物回收、纯化 ......
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