1.5pRH2304MAD6的质粒转化

    按1.2中的方法将重组质粒pRH2304MAD6转化感受态YM25235，涂布于含400mg/L的YM固体抗性平板上培养，挑取抗性克隆进行液体培养，用试剂盒进行基因组DNA提取，用引物对MAD6F和MAD6R阳性克隆的筛选，同时用引物对RKD12F：5'-ATGGCCGCTAC CCTCCGCCAGC-3'和RKD12R：5'-CTAGAGTCCCTCGACGCCCGAG-T-3'来扩增YM25235 △12-脂肪酸脱氢酶基因组序列来证明所获得的阳性克隆为YM25235菌株。

    1.6脂肪酸分析

    将转基因酵母种子液接种于50mL YM液体培养基中，置于30℃、150r/min培养48h。离心收集酵母细胞，50℃，烘干后研磨，取100mg干菌粉加入5mL 5%的KOH-CH30H溶液中，70℃反应3～5h。冷却到室温后，用6mol/L的盐酸调节溶液的pH值为2.0，加入4mL 14% BF3(BF3/乙醚)-CH3OH溶液 ......