质粒载体pIRES2-NGF-NT-3被Xho I和BamH I双酶切后进行凝胶电泳，结果在约726bp处出现一条目的条带，与NGF基因大小完全一致；质粒载体pIRES2-NGF-NT一3被Xho I和Not I双酶切后，结果在约2106bp出现一条目的条带与NGF-IRES-NT-3基因片段序列一致；质粒载体pIRES2-NGF-NT-3被BamH I和Not I双酶切后，结果在约l374bp出现一条目的条带大小与IRES-NT-3基因片段一致。载体pIRES2一NGF-NT-3经DNA测序后可知NGF与NT-3与基因库中的序列顺序完伞一致(图4)。

    2.4RT-PCR检测NGF与NT-3的表达

    采用RT-PCR方法检测各处理组HEK293细胞中NGF与NT-3的mRNA表达，检测采用NGF与NT-3特异性引物进行PCR反应，并以β一肌动蛋白作为表达的内参，采用倒置荧光显微镜观察pIRES2-EGFP与pIRES2-NGF/EGFP转染组的绿色荧光表达量约80%以上。提取总RNA逆转录采用基因特异性引物进行PCR扩增，电泳跑胶后利用光密度扫描软件进行表达量分析。结果显示：NGF基因在pIRES2-NGF/EGFP与pIRES2-NGF/NT-3转染组表达量明显高于pIRES2-EGFP转染组与空白对照组(图5)。与上述方法相似，结果显示NT-3基因在pIRES2-NGF/NT-3转染组的表达量明显高于其他3组(图6)。结果显示NGF与NT-3基因成功导入了HEK293细胞中并且得到了表达。

    2.5Western-blot检测NGF与NT-3的表达

    采用Western-blot方法检测各处理组HEK293细胞中NGF与NT-3的蛋白水平的表达 ......