丹波黑大豆GmbHLH30转录因子耐铝功能初步研究(2)
1.4转基因烟草根伸长的测定
分别取具有4～6条幼根的野生型烟草(WT)、GmbHLH30-10和GmbHLH30-20烟草无菌苗各4株，水培3d后，用0.5mmol/L、pH4.5的CaCl2溶液预处理12h后测定每株幼苗的根长。然后置入50μmol/L pH4.5的AlCl3(含0.5mmol/L CaCl2)溶液处理24h后再次测定其根长。相对根伸长率=(AlCl3处理后根长-AlCl3处理前根长)/CK根伸长。
1.5烟草植株中可溶性糖、脯氨酸和过氧化氢含量测定
分别取生根后1个月左右的WT、Gmb-HLH30-10和GmbHLH30-20烟草无菌苗各3株，置入0.5mmol/L pH4.5的CaCl2溶液预处理12h，再放人50μmol/L pH4.5的AlCl3(含0.5mmol/LCaCl2)溶液中处理24h，用于测定可溶性糖、脯氨酸(Pro)和过氧化氢(H2O2)含量。
采用蒽酮比色法测定可溶性糖含量，以μmol·g-1 FW表示。测定OD625值后代入标准曲线y=0.0345x+0.0204计算可溶性糖含量。
采用磺基水杨酸法测定脯氨酸含量，以μmol·g-1 FW表示.测定OD520值后代入标准曲线y=0.0223x-0.0286后计算脯氨酸含量。
过氧化氢(H2O2)含量采用二甲酚橙法进行测定，以μmol.g-1 FW表示。
1.6数据统计分析
所有生理生化指标测定至少设置3次重复，用TEST法对所得数据进行统计学分析和差异显著性分析。星号表示50μmol/L AlCl3胁迫处理24h后转基因株系和WT株系间生理指标间存在显著性差异(*表示P<0.05，**表示P, 百拇医药(宋倩 钱绍方 陈宣钦 陈丽梅 李昆志)
分别取具有4～6条幼根的野生型烟草(WT)、GmbHLH30-10和GmbHLH30-20烟草无菌苗各4株，水培3d后，用0.5mmol/L、pH4.5的CaCl2溶液预处理12h后测定每株幼苗的根长。然后置入50μmol/L pH4.5的AlCl3(含0.5mmol/L CaCl2)溶液处理24h后再次测定其根长。相对根伸长率=(AlCl3处理后根长-AlCl3处理前根长)/CK根伸长。
1.5烟草植株中可溶性糖、脯氨酸和过氧化氢含量测定
分别取生根后1个月左右的WT、Gmb-HLH30-10和GmbHLH30-20烟草无菌苗各3株，置入0.5mmol/L pH4.5的CaCl2溶液预处理12h，再放人50μmol/L pH4.5的AlCl3(含0.5mmol/LCaCl2)溶液中处理24h，用于测定可溶性糖、脯氨酸(Pro)和过氧化氢(H2O2)含量。
采用蒽酮比色法测定可溶性糖含量，以μmol·g-1 FW表示。测定OD625值后代入标准曲线y=0.0345x+0.0204计算可溶性糖含量。
采用磺基水杨酸法测定脯氨酸含量，以μmol·g-1 FW表示.测定OD520值后代入标准曲线y=0.0223x-0.0286后计算脯氨酸含量。
过氧化氢(H2O2)含量采用二甲酚橙法进行测定，以μmol.g-1 FW表示。
1.6数据统计分析
所有生理生化指标测定至少设置3次重复，用TEST法对所得数据进行统计学分析和差异显著性分析。星号表示50μmol/L AlCl3胁迫处理24h后转基因株系和WT株系间生理指标间存在显著性差异(*表示P<0.05，**表示P, 百拇医药(宋倩 钱绍方 陈宣钦 陈丽梅 李昆志)