1.2.3组织总RNA的提取和cDNA的获得

    分别取100mg不同小鼠脾脏组织于研钵中，迅速加入液氮，研成粉末。加入TRIzol Reagent提取总RNA。紫外分光光度仪定量，琼脂糖凝胶电泳检测其完整性。然后按逆转录试剂盒说明获得cDNA。

    1.2.4PCR扩增重链Fd段基因及轻链L基因

    反应条件为：95℃预变性3min， 95℃变性30s，95℃退火30s，72℃延伸1min，共30个循环后72℃延伸10min。PCR产物经琼脂糖凝胶电泳鉴定后，按DNA凝胶回收试剂盒说明回收。

    1.2.5轻链L基因与pComb3载体重组

    轻链L基因经Xba I和Sac I双酶切，酶切产物进行凝胶回收并定量。T载体和回收后的轻链L基因，经T4 DNA连接酶连接，将连接产物热激转化至E.coli Topl0感受态细胞，并涂布LB/Amp/X-Gal/IPTG平板，37℃过夜培养。统计蓝、白斑数，并计算重组率 ......