小鼠卵巢几个重要发育事件的初步研究(2)
取出的生殖嵴组织直接投入含有4%多聚甲醛的1.5mL的EP管中进行固定,置于4℃固定过夜。第二天用镊子取出固定好的生殖嵴组织,以包埋纸包裹好组织,然后进行组织石蜡包埋。1.3.2第2d、5d、10d及老年期小鼠卵巢石蜡组织的制备
分别取出生后第2d、5d、10d小鼠,处死后,于显微镜下取出其卵巢组织,取出的卵巢组织以4%多聚甲醛固定,4℃过夜。第二天进行组织石蜡包埋。
由于老年小鼠卵巢组织需要进行细胞增殖检测实验,故需要在处死前进行Edu注射,具体方法同E12.5生殖嵴组织中操作。老年小鼠处死后,取出其卵巢组织,4℃固定过夜。第二天进行组织石蜡包埋。
1.3.3卵巢石蜡组织切片Edu免疫荧光染色及检测
Edu染色作为一种检测细胞有丝分裂的简便和有效方式,广泛用于细胞增殖的检测研究[6]。本研究中通过对活体小鼠进行Edu注射后,取其卵巢组织进行免疫荧光染色,以检测研究组织细胞的增殖状况。
制备的石蜡组织行4pm切片,然后进行抗原修复。实验时配置Edu染色液,吹打混匀后,避光反应30min,吸去反应液后,可直接于荧光显微镜下进行观察或继续进行其他免疫荧光染色
1.3.4卵巢石蜡组织切片MVH免疫焚光染色及检测
是仅特异性表达于生殖细胞中的基因 ......
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