用显微注射的方法将带有目的片段的pUAST质粒注射到果蝇胚胎中。P因子的特征序列是载体pUAST的核心结构，它位于目的基因的上下游，转基因过程是在重组酶A2-3的帮助下完成，A2-3重组酶可以特异性地作用于P因子，将位于其内部的外源基因整合人果蝇基因组中，以达到构建转基因果蝇的目的。

    将重组的含有Tau基因pUAST载体与Helper质粒(可表达重组酶A2-3)配制成显微注射液注射到果蝇胚胎中，并在其下一代中筛选转基因果蝇建系。当转基因果蝇平衡建系后，提取转基因果蝇基因组DNA作模板，PCR鉴定转基因果蝇的建立是否成功(图3)。2.3pGMR-GAL4驱动Tau基因截短片段的过表达

    在果蝇眼部表达目的基因，如果目的蛋白对细胞有毒性，这种毒性作用会被放大到果蝇的整个复眼，果蝇的眼睛会变得粗糙，小眼的排列也变得杂乱无章[8]。这就是为什么在果蝇的过表达研究中，越来越多的人倾向于用pGMR-GAL4特异地驱动目的基因在果蝇眼睛中表达，以此来研究目的蛋白的毒性。本实验用pGMR-GALA驱动Tau基因截短片段在果蝇眼部特异性的表达，直观地观察Tau蛋白截短片段对果蝇发育过程的影响(图4)。本实验观察到GFP在果蝇眼睛中过表达对果蝇眼睛的发育没有毒性作用(图4B)，Tau蛋白在果蝇眼睛中过表达对果蝇眼睛发育的毒性作用是Tau蛋白本身的特性，同时说明果蝇的眼睛为我们研究Tau蛋白的毒性提供一个很好的系统。扫描电镜的结果显示在果蝇眼睛中过表达Tau蛋白截短片段对果蝇眼睛的发育造成的毒性没有全长Tau蛋白的毒性明显。

    随后，我们提取果蝇头部总蛋白，检测Tau蛋白在眼睛中的表达情况。Western blotting结果见图5，每种转基因果蝇都选择4株来验证目的蛋白的表达情况。但是，我们在蛋白水平没有检测到Taul-44的表达。3讨论

    正向遗传学是将基因突变或缺失，使其功能丧失或减弱，观察基因突变对模式动物表型的影响，进而研究基因功能[9]。利用模式生物进行基因功能研究是一个非常有效的方法 ......