利用SignalP 4.1服务器分析GrMK蛋白，未发现信号肽，表明该蛋白为非分泌型蛋白。利用TMHMM工具预测GrMK蛋白的跨膜螺旋区，结果表明GrMK蛋白不含有跨膜区域(图4)，为非膜蛋白。使用CldoroP在线软件对叶绿体转运肽进行预测，结果表明GrMK蛋白不含叶绿体转运肽。使用WoLF PSORT软件进行亚细胞定位分析，结果为GrMK蛋白在细胞核、叶绿体和细胞质的定位系数分别为8.0、4.0和2.0，这与文献报道的MVA途径存在于细胞质中的结论相矛盾[3]。

    对GrMK基因进行稀有密码子分析，结果表明GrMK基因中稀有密码子仅占0.78010，且无二联或三联稀有密码子连续出现的情况，因此可选用表达菌BL21或Rosetta (DE3)进行原核表达。

    2.3 GrMK基因原核表达载体的构建

    使用BamH I和Xho I双酶切质粒pGEX-4T-1-GrMK ......