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编号:12712571
高糖干预骨髓来源MAPC细胞周期的研究(2)
http://www.100md.com 2015年3月1日 《生命科学研究》 2015年第3期
     1.2.4 Western-blot测定

    从各干预组MAPC细胞中提取总蛋白,利用BCA法测定蛋白浓度,并依据测定的浓度在配制的PAGE胶中上样电泳,电泳后转膜、封闭,然后依据实验目的,各PVDF膜分别孵育在5010脱脂牛奶中,其中加入相应的一抗处理,在经过相应二抗处理后用ECL工作液显色并利用高敏胶片(美国GE公司)在暗室中曝光成像。通过核酸蛋白分析仪扫描分析后,用美国NIH提供的ImageJ软件分析条带灰度和面积后,通过内参照p-Actin校正,结果将用于蛋白表达量的半定量分析。

    1.2.5 ELISA分析

    待测样品(无论细胞培养上清或是细胞浆)需要加入盐酸激活,再加入氢氧化钠中和激活的样品,然后用TGF-pi ELISA试剂盒(美国R&DSystems公司)处理待测样品,利用Victor 3V 1 420多标记微孔板检测仪,在优化的450 nm波长处读取吸待测样品的光度值,并依据标准曲线所得公式计算各样浓度。

    1.2.6免疫荧光分析

    将实验用MAPC细胞依据实验目的种植在chamber板中 ......
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