VHL蛋白在结直肠癌中的表达及意义
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【摘要】目的：探讨VHL蛋白在结直肠癌中的表达及意义。方法：应用免疫组化Envisin二步法检测58例结直肠癌及20例结直肠粘膜炎症组织中VHL蛋白的表达；结果：VHL蛋白在结直肠癌组织中的阳性率为46.55%(27例/58例)，低于在结直肠粘膜炎症组织中的95%(19例/20例)，差异有显著性(P<0.05)；结直肠癌中VHL蛋白的表达与肿瘤淋巴结转移有关(P<0.05)；结论：VHL表达在结直肠癌中的发生、发展中可能扮演着重要的角色。
【关键词】VHL蛋白；结直肠癌；免疫组化
【中图分类号】R735.3+5【文献标识码】B【文章编号】1007-8231(2011)05-0051-02
VHL基因是1993年被鉴定的肿瘤抑制基因，主要通过其编码的蛋白质pVHL发挥抑癌作用。它在VHL相关肿瘤中表达明显减少，如视网膜及中枢神经系统的血管母细胞瘤、肾细胞癌、嗜铬细胞瘤及胰腺肿瘤等，这表明VHL的失调与肿瘤之间存在着直接的关系。
目前，VHL在结直肠癌中的表达在国内外少有报道。因此，本实验采免疫组化检测了结直肠癌及结直肠的黏膜慢性炎症中VHL 蛋白的表达,并分析其与临床病理指标之间的关系。
1材料与方法
1.1研究材料：收集贵阳医学院附属医院1994年1月—1998年12月间结直肠癌手术标本共计348例，选取其中具有完整临床及随访资料并且术前均未经化疗和放疗的同一组织学类型(管状腺癌Ⅱ级)及治疗方法相同的病例58例。同时收集同期结直肠粘膜炎症标本20例做对照。
1.2主要试剂：浓缩型鼠抗人单克隆抗体VHL购自迈新生物有限公司，SuperPicTure通用型试剂盒购自广州深达生物有限公司，DAB显色剂购自北京中杉生物有限公司。
1.3 方法：
1.3.1 标本处理与常规HE染色,按常用病理技术操作规范进行。
1.3.2免疫组织化学染色：采用Envision法。VHL抗体工作浓度1:75。操作按说明书进行。用PBS代替一抗做空白对照。
1.3.3 随访 主要以电话、信访及门诊方式获得，生存期的计算从手术日期起到随访日期止或由于复发、转移而死亡的日期。
1.3.4 结果判定：免疫组化结果以胞浆内出现浅黄色至棕褐色颗粒为阳性细胞标志与大多数细胞染色特征决定。
1.3.5 统计学方法：运用SPSS16.0统计软件数据包进行数据处理，采用x2检验和 x2关联性分析。
2结果
2.1 VHL在癌组织及正常组织中的表达:
VHL蛋白主要表达于细胞浆，阳性染色细胞呈棕黄色颗粒或团块。VHL蛋白在癌组织及直肠黏膜慢性炎症组织中都能检测到(图1、图2)。20例慢性炎症组织中阳性率为95%(19/20)，而在结直肠癌组织中为46.55%(27/58)，可见，VHL在结直肠癌组中的表达明显低于炎症组，两者比较差异有显著性(P<0.05)。见表1。
2.2 VHL的表达与结直肠癌临床病理参数之间的关系
VHL蛋白在结直肠癌中的表达与患者的年龄、浸润深度、Duckes分期及生存期无关。而与有无淋巴结转移有关。VHL蛋白在有淋巴结转移组中的阳性表达率为17.39%(4/23)，在无淋巴结转移组中的阳性表达率为65.71%(23/35)，两者间的差异有显著性(P<0.05)。见表2。
表1 结直肠癌及慢性炎症组织中VHL的表达
表2 VHL的表达与结直肠癌临床病理参数之间的关系
3讨论
VHL (von Hippel—Lindau)基因是1993年被鉴定的肿瘤抑制基因，是在研究VHL综合征时发现的。VHL综合征是常染色体显性遗传病，也是一种遗传性肿瘤综合征。常见易发肿瘤为：视网膜及中枢神经系统的血管母细胞瘤、肾细胞癌、嗜铬细胞瘤及胰腺肿瘤等[1]。
VHL基因主要通过其编码的蛋白质pVHL发挥抑癌作用。pVHL有如下功能：(1)调节延长因子Elongin的延长活性。pVHL与ElonginB和ElonginC蛋白结合而组成pVHL-ElonginC-ElonginB复合体(VCB),阻断了ElonginABC复合体的形成，使mRNA聚合酶Ⅱ失去有效的激活物而不能激活，导致转录延长过程的终止。(2)介导多种蛋白的降解。pVHL具有α和β两个主要的区域[4]， pVHL通过β区域特异性识别和结合底物分子，再通过α区域呈递底物分子，从而起介导蛋白降解的作用。[2](3)细胞周期调控。Cu12是一种胞浆蛋白，其作用靶点是核内的细胞周期素，Cu12由胞浆进入胞核发挥功能，严格依赖pVHL的存在和VCB复合物的完整性。细胞周期素依赖性激酶抑制剂p 27蛋白的稳定与积累，也严格依赖pVHL的存在，说明VHL在调节细胞周期方面有潜在的功能。
(4)其它功能。pVHL参与细胞间信号传导、细胞间基质纤维结合素形成及血管形成等[3]。
本实验中VHL蛋白的表达，显著低于慢性炎症组织，表明VHL蛋白的表达可能与结直肠癌的发生、发展相关。本实验还表明VHL蛋白表达可能与结直肠癌肿瘤淋巴结转移有关,而这些临床病理因素对结直肠癌的恶性程度及预后有着重要的影响。因此检测VHL蛋白的表达可能成为判断结直肠癌恶性程度及预后一个重要指标。
作为一种新的肿瘤转移抑制基因，VHL基因的表达与DNA甲基化、杂和性缺失、外显子的DNA片段的突变、mRNA的表达等有关。VHL基因的表达沉默的机制还需更进一步的研究和证实。因此，VHL基因在分子水平上的研究将有望成为今后一个新的热点 ......
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