溶血和带血细胞标本对HBsAg结果的影响研究
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【摘要】 目的：探讨溶血标本对HBsAg结果的影响并提出针对性预防措施。方法：选择我院30例HBsAg(+)和30例HBsAg(—)临床资料作为研究对象，分别记为观察组及对照组，两组标本均进行常规检测及溶血后检测，观察溶血对HBsAg检测结果的影响。结果：观察组两次检测均为(+)，对照组非溶血检测为(—)，溶血检测HBsAg(+)10例，HBsAg(—)20例。结论：标本溶血后对HBsAg(+)检测结果无影响，但是会导致HBsAg(—)出现假阳性，溶血标本不宜进行HBsAg检测。
【关键词】标本检测；溶血；乙肝表面抗原；ELISA
【中图分类号】R446.1 【文献标识码】B 【文章编号】1007-8231(2011)11-1877-01
乙肝表面抗原(HBsAg)检测是诊断乙型肝炎的主要指标，随着检验技术的不断发展酶联免疫法因其简便，灵敏度高，不需要特殊设备，被广泛应用，虽然检测时标本要求不能溶血，但是在实际工作中[1]，会遇到各种原因造成标本溶血，溶血标本中非特异性物质对试验结果会造成一定的影响。本文介绍溶血标本对HBsAg检测结果的影响。
1 资料和方法
1.1 一般资料
选择我院30例HBsAg(+)和30例HBsAg(—)临床资料作为研究对象，分别记为观察组及对照组，观察组男性19例，女性11例，年龄在19~56岁之间，平均35.5±4.4岁；对照组男性20例，女性10例，年龄在20~54岁之间，平均34.4±4.8岁。
1.2 方法 酶联免疫试剂盒由浙江艾康生物技术有限公司提供，制备溶血标本，受检血清置于低温冰箱(—40℃)冷冻20min，取出融化以3000r/min离心10min，分离溶血血清。反应条每孔加入待检测标本50μl，设阴阳性对照各2孔，每孔加入阴性对照或阳性对照各1滴，设置空白对照1孔，每孔加入酶结合物1滴，空白对照除外，摇匀，封板，置于37℃避光孵化30min，弃孔内液体，洗板5次晾干，每孔加显色剂A、B各1低，置于37℃避光孵育15min，目测比色，肉眼观察无色为HBsAg(—)，显蓝色为HBsAg(+)[2]。
1.3 统计学处理 使用SPSS13.0对各项资料进行统计分析，各项参数以均值±标准差(x±s)表示，使用X2,t检验，P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
两组标本检测结果见表1
观察组两次检测均为(+)，对照组非溶血检测为(-)，溶血检测HBsAg(+)10例，HBsAg(-)20例。
3 讨论
用ELISA检测HBsAg有快速简便、特异性强、灵敏度高等优点，是各级实验室常用的试验方法，溶血标本应用ELISA法检测易产生假阳性，其原因可能为溶血血清中含有过氧化酶物质，红细胞或血红蛋白中亚铁血红素，HBsAg产生假阳性，溶血的原因较多[3]，主要是体外溶血及体内溶血两种，体内溶血是物理因素造成的，如人工心脏瓣膜或大血管手术后，生物因素如恶性疟疾、药物毒性反应引起的，体外溶血是代谢性因素如遗传性疾病引起血细胞脆性增加、机械性破坏、冷冻、血液接触表面活性剂等[4]。此外采集过程中注射器或容器不干燥、不清洁，淤血时间过久，抽血消毒时消毒剂未擦干就采集血液标本，出血速度过快等。
在本组患者中HBsAg(-)溶血患者出现10例假阳性，其原因可能为溶血血清中含有过氧化物酶物质，血红蛋白亚铁血红素、红细胞与聚乙烯孔被抗原或抗体结合[5]，在洗涤过程中不能完全被洗涤，谷胱甘肽等过氧化物酶有明显相关性，谷胱甘肽广泛存在于人体组织及细胞中，发生溶血时，过氧化物酶进入血浆，大量吸附在细胞碎片及纤维蛋白上[6]，增加了洗涤的难度，可使过氧化氢释放出原生态氧，催化底物，甲苯胺生产可溶性物质显色，易出现假阳性。检测一般采用一步检测法，往往难以洗脱残留的过氧化物酶催化底物四甲基联苯胺显蓝色，并产生假阳性，有研究表明对标本进行二部法检测[7]，首先将血清清洗掉，残留的过氧化物酶含量极微，温育过程中不会与酶结合物所含的抗体、抗原结合，经过两次洗涤，降低了残留的可能性，保证检测结果准确。溶血标本在临床检验中一般不进行检测，要求退回重新采集标本，增加了患者的痛苦，延长了检验时间。溶血标本能使未感染乙型肝炎病毒的健康患者出现假阳性，增加了临床诊断的困难[8]，同时也给患者带来很大的心理压力。为避免溶血对HBsAg检测结果的影响，要采取积极的预防措施，医务工作者熟练操作，避免人为因素导致溶血的发生，要从标本采集、检测过程、试剂选取、设备选取、检测方法的选择都要做要一丝不苟，龙宪和等采用二部法操作能排除溶血释放的Hb对HBsAg检测影响说明洗板质量指ELISA检测中有重要作用。对于乙肝表面抗原阳性的溶血标本，其结果一定要慎重，务必做好准确无误，否则会给患者带来极大的痛苦，造成精神压力。标本溶血后对HBsAg(+)检测结果无影响，但是会导致HBsAg(-)出现假阳性，溶血标本不宜进行HBsAg检测。
参考文献
[1] 孙正伟，薛瑞贤，王键.酶联免疫法一步法检测乙肝表面抗原前带现象的初步探讨[J].中华医学检验杂志，2009，2(1)：25.
[2] 张小洁，刘建芝.真空采血标本溶血原因分析及预防措施[J].护士进修杂志，2008，16(3)：11.
[3] 许彬，朱虎定.酶联免疫法检测乙肝表面抗原影响因素的探讨[J].临床检验杂志 ......
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