反相高效液相色潽法测定复方养阴生肌散中龙胆苦苷含量的研究
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2010年8月1日
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【摘要】目的:建立反相高效液相色谱法测定养阴生肌散中龙胆苦苷的含量。方法:色谱柱:Aglient XDB-C18(250*4.6mm);流动相:水-乙腈(80:20);流速:1.0ml﹒min-1;检测波长:254nm。结果:龙胆苦苷在20～110ug﹒ml-1范围里线性关系良好,平均回收率为98.10%,符合分析要求。结论:所建方法操作简便、结果准确,重复性好,可用于该制剂的质量控制。
【关键词】高效液相色谱法;复方养阴生肌散;龙胆苦苷
【中图分类号】R927.2【文献标识码】A【文章编号】1007-8517(2010)16-017-2
复方养阴生肌散是由青黛、龙胆草、黄柏、薄荷、甘草等多味中药组成的复方制剂。由于成分复杂,各味药的含量均不是很高,有效成分浓度相对较低,传统的TLC法定量分析难以达到准确分析,误差太大,很难达到定量分析的目的,因此,有必要创建HPLC法测定其主要含量。龙胆草是处方主要组成部分,其指标成分龙胆苦苷(Gentiopicrin)不仅性质稳定且单味药的提取率高,因此建立复方养阴生肌散中龙胆苦苷的高效液相色谱法,可用于检测处方药的提取工艺,监控复方养阴生肌散的制剂质量。方法简便、迅速、准确,重现性好。
1仪器与试药
Aglient 1100高效液相色谱仪;Aglient紫外检测器;KQ2200型超声波清洗仪;TGL-16C型离心机;减压真空干燥器。
龙胆苦苷对照品由中国药品生物制品检定所提供(批号:11070-200810);乙腈为色谱醇;水为重蒸水;所用其它试剂均为分析纯。
2方法与结果
2.1色谱条件
色谱柱:Aglient XDB-C18(250*4.6mm);流动相:水-乙腈(80:20);流速1.0ml﹒min-1;检测波长:254nm;进样量:10μl;柱温:25.0℃;外标法。理论塔板数按龙胆苦苷峰计算不得低于3500。
2.2溶液的制备
2.2.1对照品溶液
取龙胆苦苷对照品置五氧化二磷减压干燥器中放置12小时以上,精密称定,用甲醇配制成浓度为0.8mg﹒ml-1的对照品溶液。
2.2.2供试品溶液
取本品约1.84g,精密称定,置50ml烧杯中,加甲醇适量,超声10min,放至室温,过滤到25ml的容量瓶中,再用甲醇稀释并定容至刻度,摇匀。再精密移取上述溶液8ml至25ml容量瓶,加甲醇稀释并定容至刻度,摇匀,即为供试品溶液。
2.2.3阴性对照溶液
取除龙胆草外处方中其它药材,按“2.2.2”项下供试品溶液的制备方法制备,即得阴性对照品溶液。
2.3专属性实验
分别取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照品溶液,按“2.1”项下色谱条件操作,记录色谱图。结果供试品与对照品溶液均在相同保留时间出现吸收峰,空白溶液在此处无吸收峰,即本试验条件下龙胆苦苷与其它组分分离完全。结果见图1。
2.4线性关系考察
取龙胆苦苷对照品适量,精密称定,制备浓度为0.41mg﹒ml-1的对照品储备液,精密吸取对照品储备液0.5ml、1.0ml、1.5ml、2.0ml、2.5ml分别置10ml容量瓶中,用甲醇稀释并定容至刻度,摇匀,依次进样10μl,记录峰面积。以浓度-峰面积进行回归,所得线性方程为:y=12519x+23859,相关系数:r=0.9998(n=5),结果表明龙胆苦苷在20～110ug﹒ml-1范围内线性关系良好。
图1 养阴生肌散龙胆苦苷专属性考察
A-阴性溶液;B-供试品溶液;C-龙胆苦苷对照品溶液
2.5精密度试验
精密吸取同一浓度龙胆苦苷对照品溶液(82ug﹒ml-1),重复进样7次,进样量10μl,以龙胆苦苷峰面积计算,RSD为0.89%(n=7)。结果表明,精密度较好。
2.6重复性试验
分别取同批样品粉末6份,精密称定。按“2.2”项下方法制备供试品溶液,并按“2.1”项下条件进样分析。计算样品中龙胆苦苷含量,结果RSD为1.25%。结果表明,重复性较好。
2.7加样回收试验
采用加样回收法,取样品适量,精密称定,分别精密加入已知含量的低、中、高浓度的龙胆苦苷对照品,按“2.1”“2.2”项方法操作,计算回收率。结果见表1。
表1 回收率测定结果
测得量 (ug)加入量标准品(ug)回收率(%)平均回收率(%)RSD(%)
77.0178.6897.8898.100.41
76.3778.6897.06
77.378.6898.25
102.92104.9198.11
103.08104.9198.26
102.55104.9197.75
118.86120.6598.52
119.07120.6598.69
118.68120.6598.37
2.8样品测定
取三批样品。按“2.2”项方法制样,按“2.1”项条件操作,计算三批样品中龙胆苦苷的平均含量为0 ......
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