临床血小板应用后血液促凝功能的比较研究(1)
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2010年8月1日
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【摘要】目的:比较冰冻血小板和新鲜血小板输注后血液的促凝功能。方法:该课题以100名志愿患者为研究对象,抽取其新鲜血液2ml后,随机输注50份冰冻血小板和50份新鲜血小板悬液,24小时后重新采血。分别经酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测冰冻血小板和新鲜血小板输注前后的β-血小板球蛋白(β thromboglobulin,β-TG)、血小板α-颗粒膜蛋白-140(granule membrane protein 140,GMP-140)和血小板第4因子(platelet factor 4,PF4)。采用Born氏比浊法检测冰冻血小板和新鲜血小板输注前后的聚集率,所用诱导剂的终浓度为花生四烯酸(arachidonic acid,AA)782.0 µmol/L、腺苷二磷酸(adenosine diphosphate,ADP)47.6µmol/L和胶原(collagen)4.8mg/L。结果:冰冻血小板释放的β-TG、GMP-140和PF4分别为(51.5±4.4)ng/ml、(32.1±6.8)ng/ml和(25.5±4.9)ng/ml,新鲜血小板释放的β-TG、GMP-140和PF4分别为(40.3±4.0)ng/ml、(24.3±4.8)ng/ml和(18.8±3.6)ng/ml,冰冻血小板释放的β-TG、GMP-140和PF4均高于新鲜血小板(P<0.05)。在AA、ADP和胶原的诱导下,冰冻血小板的聚集率分别为(81.15±6.39)%、(83.04±6.09)%和(81.25±8.28)%,新鲜血小板的聚集率分别为(76.11±5.77)%、(76.59±5.30)%和(72.40±6.94)%,冰冻血小板对AA、ADP和胶原的聚集率均高于新鲜血小板(P<0.05～0.01)。结论:冰冻血小板的促凝血功能强于新鲜血小板,在血源日趋紧张的今天,可以大量长期储备冰冻血小板,以满足临床应用血小板的需求。
【关键词】冰冻血小板;新鲜血小板;促凝功能
【中图分类号】R-33【文献标识码】A【文章编号】1007-8517(2010)16-028-2
机采新鲜浓缩血小板,简称新鲜血小板。目前临床上广泛应用机采新鲜血小板输注治疗血小板减少性疾病,但由于机采新鲜浓缩血小板的来源有限,满足不了临床的需求,便应用冰冻新鲜血小板的临床输注[1]。冰冻血小板虽然具有保存期长、无污染危险、使用方便、随用随取以及有利于出血性危重患者的及时抢救治疗等优点[2],但其促凝功能与新鲜血小板不同。β-血小板球蛋白(β thromboglobulin,β-TG)、血小板α-颗粒膜蛋白-140(granule membrane protein 140,GMP-140)和血小板第4因子(platelet factor 4,PF4)是血小板特异性球蛋白,在血小板活化时由血小板内的α颗粒释放[3,4],测定β-TG、GMP-140和PF4的含量可反映血小板的促凝功能。本文比较了冰冻血小板和新鲜血小板的输注后机体促凝功能变化。
1材料与方法
1.1血小板制品
冰冻血小板和机采新鲜血小板均来自汕头市中心血站。新鲜血小板使用MCS+血细胞分离机(美国血液技术公司)采集,供者均符合《卫生部献血者健康检查标准》,机器连续采集献血者全血3000～4000ml,获得浓缩血小板悬液终体积220～250ml为1个治疗量,其血小板数值>215×1011,于当日采集后3h内输注,输注量为1个治疗量。采集出的新鲜血小板在无菌条件下注入浓度为4%～6%的二甲基亚砜,置于-8°C以下冰箱内保存即为冰冻血小板,保存期为半年。
1.2血小板输注
随机选择100名志愿输注新鲜血小板或冰冻血小板患者,输注前分别先抽取新鲜血液2ml。分别取50份冰冻血小板和50份新鲜血小板悬液,每份20单位。冰冻血小板输注前置42°C恒温箱解冻,经生理盐水洗涤。采用随机输注方法,输注24小时后再分别抽取新鲜血液2ml。
1.3β-TG、GMP-140和PF4检测
将输注前后分别抽取的新鲜血液,3000×g离心20min,取上清液,采用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosor
-bent assay,ELISA)检测β-TG、GMP-140和PF4。试剂采用罗氏公司(Roche Diagnostics)的ELISA试剂盒,变异度分析控制在15%以内。
1.4血小板聚集功能
采用Born氏比浊法[5]检测输注前后血小板的聚集率,所用诱导剂的终浓度为花生四烯酸(arachidonic acid,AA)782.0µmol/L、腺苷二磷酸(adenosine diphosphate,ADP)47.6µmol/L和胶原(collagen)4.8mg/L。
1.5统计学分析
数据按公式“促凝功能变化=输注后促凝功能-输注前促凝功能”,以x±s表示,采用SPSS软件包进行完全随机化设计资料的方差分析。
2结果
2.1输注前后冰冻血小板和新鲜血小板β-TG的表达情况
图1 冰冻血小板和新鲜血小板β-TG的表达情况
*:与冰冻血小板相比,P<0.05
ELISA检测显示,输注冰冻血小板后β-TG为51.5±4.4ng/ml,输注新鲜血小板β-TG为40.3±4.0ng/ml,输注冰冻血小板后释放的β-TG高于新鲜血小板(P<0.05)(见图1)。
2.2输注前后冰冻血小板和新鲜血小板GMP-140的表达情况 ......
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