山慈菇提取物对结肠癌HT29细胞凋亡的影响(2)

http://www.100md.com 2016年8月1日 《中国民族民间医药·下半月》2016年第8期

     2.2 MTT法检测细胞抑制率 取对数生长期细胞，用0.25%胰酶消化并收集细胞，以RPMI1640培养液调整细胞密度至1×105个/mL，接种于96孔培养板中，每孔0.1mL，在培养箱中培养24h使细胞贴壁。空白对照组加入培养基0.1mL，不同浓度的山慈菇提取物组以10、20、30mg/mL培养细胞24、48、72h后，吸弃各孔中培养液，每孔加入0.1mLMTT[含 5%磷酸盐缓冲液(PBS)]，在37℃下孵育4h后弃去上清，加入0.5%DMSO 0.1mL，振荡摇匀，室温放置10min。在0.1mL DMSO中发现蓝紫色的MTT甲臜沉淀物，使用ELISA法以酶标仪于490nm波长处测定OD值，计算细胞抑制率=(1-实验组OD值/空白对照组OD值)×100%。

    2.3 流式细胞术检测细胞凋亡 取对数生长期细胞，用0.25%胰酶消化并收集细胞，以RPMI1640培养液调整细胞密度至1×105个/mL，接种于96孔培养板中，每孔0.1mL，移入培养箱中培养24h使细胞贴壁。以0(空白对照组)、10、20、30mg/mL山慈菇提取物培养细胞24h后 ......