琴叶榕根提取物对α-葡萄糖苷酶、α-淀粉酶的抑制作用(2)
2.2.3 α-淀粉酶溶液的制备 将含酶冻干粉用磷酸盐缓冲溶液(67mmol/L,pH 6.8)溶解并定容于1000mL容量瓶,即得500.0U/mL酶溶液,分装,于-20 ℃冰箱冻存,使用前解冻并用磷酸盐缓冲溶液稀释至3.75U/mL。2.3 对α-葡萄糖苷酶的抑制活性 琴叶榕提取物对酵母来源和小鼠小肠来源α-葡萄糖苷酶抑制实验的反应体系参考文献[11]方法,并在其基础上进行了改进,具体如下:将67mmol/L pH 6.8 的磷酸盐缓冲溶液250μL、待测样品50μL(4000.0、2000.0、1000.0、500.0、100.0、0.0μg/mL)、0.1U/mL α-葡萄糖苷酶 300μL,振荡混匀,37 ℃恒温孵育 20min,加入4.0mmol/L pNPG 200μL,振荡混匀,37℃恒温反应 30min 后,加入碳酸钠800μL 终止反应,经0.45μm 膜过滤后,采用 HPLC 检测,按公式(1)计算对 α-葡萄糖苷酶的抑制率。阿卡波糖作为阳性对照。
α-葡萄糖苷酶抑制率%=(A0-Ai+Aj)/A0×100% 公式(1)
注:A0 为缓冲液+酶液+底物反应后的 pNP 浓度;Ai:样品+酶液+底物反应后的 pNP 浓度;Aj:样品+缓冲液+底物反应后的 pNP 浓度 ......
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