3，5-二硝基水杨酸比色法测定黄芪多糖的含量(2)
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2.3.4精密度试验精密量取总糖溶液和单糖溶液2ml，各5份，分别置于10ml具塞刻度试管中，照“2.3.1”项下自“加水使成2ml”起，依法显色，测定吸收度。结果总糖吸收度平均值为0.524，RSD%=1.06%(n=5)；单糖吸收度平均值为0.231，RSD%=1.37%(n=5)。说明本法精密度良好。
2.3.5重复性试验取同一批的黄芪粗多糖样品制备供试品溶液5份，进行含量测定。结果样品中多糖含量平均为51.1%，RSD%=1.92%。
2.3.6样品加样回收试验[5]精密称取黄芪粗多糖(批号：070408)5份，每份约17.5mg，精密加入对照品适量，按含量测定方法测定，结果表明本法回收率良好，见表2。
2.3.7样品多糖含量测定精密量取总糖溶液和单糖溶液2ml，分别置于10ml具塞刻度试管中，照“2.3.1”项下自“加水使成2ml”起，依法显色，测定吸收度，从标准曲线中回归方程计算出总糖和单糖含量，由总糖含量减去单糖含量，即得多糖的含量。对4批样品进行多糖含量测定，结果见表3。
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3讨论
3.1多糖含量测定方法的选择测定黄芪多糖含量的方法，还有苯酚-硫酸法、硫酸-蒽酮法[7]，这两种方法测定多糖含量时，无法去掉单糖成分的干扰，测定结果比实际含量偏高，而且两种方法都用到硫酸，硫酸遇水剧烈放热，从而显色条件难以控制，影响测定结果，导致线性考察不稳定，高浓度硫酸具有严重的腐蚀性，不便操作。与前两种方法比较，3,5-二硝基水杨酸法试剂较稳定，操作简便、快速，灵敏度高，在去除了单糖成分的干扰之后，测定结果准确，能够广泛应用。
3.2显色条件的考察
3.2.1反应时间精密吸取对照品溶液0.8ml，平行5份，置于10ml具塞刻度试管中，加水使成2ml，精密加入3,5-二硝基水杨酸试液2.0ml，混匀，分别在100℃水浴中加热1、3、5、7、9min，取出，立即用冰水浴冷却至室温，加水3.0ml，摇匀，用相应的试剂作空白，在500nm测定吸收度。反应1min吸光度很小，反应3min以后，吸光度基本无变化，综合考虑，选择5min为反应时间。
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3.2.2反应温度精密吸取对照品溶液0.8ml，平行5份，置于10ml具塞刻度试管中，加水使成2ml，精密加入3,5-二硝基水杨酸试液2.0ml，混匀，分别在60、70、80、90℃和沸水浴中加热5min，取出，立即用冰水浴冷却至室温，加水3.0ml，摇匀，用相应的试剂作空白，在500nm测定吸收度。反应温度为60、70、80℃时，吸光度较低，90℃和沸水浴时吸光度较高但相差不大，综合考虑，选择沸水浴为反应温度。
参考文献
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(收稿日期：2009.02.15), http://www.100md.com(夏春森 韦史利 钟艳红)