PPARγ转录阻遏NF-κβ通路抗体外循环肺损伤的影响及作用机制
明显降低,二聚体,1材料与方法,2结果,3讨论
杨 威 张小强 董 啸南昌大学第二附属医院心胸外科,江西 南昌 330008
体外循环心脏手术为外科常用治疗方法,由于手术过程常合并全身炎症反应和缺血再灌注损伤,往往引起肺功能下降,对术后患者疾病康复产生不利影响[1]。目前,关于体外循环肺保护的研究越来越受到关注,相关机制涉及白细胞反应、补体激活、氧自由基过量产生、细胞因子作用等[2]。
过氧化物酶体增殖物激活受体 (PPARs)为核激素受体超家族成员。研究表明,PPARγ参与机体多种生理反应调节,尤其对炎性反应发挥了广泛的调节作用,如降低活化氧释放、减少细胞因子以及影响细胞的增殖分化和凋亡[3]。然而,关于PPARY在体外循环 (CPB)术后肺损伤过程中如何变化鲜见报道。研究采取常规体循环肺损伤模型,以分析PPARγ在体外循环肺损伤中的作用及其机制,现报道如下。
1 材料与方法
1.1 动物模型与分组 动物为成熟雄性昆明种大鼠,体外循环肺损伤大鼠模型由南昌大学心血管病研究所提供,体重250~300g。根据干预方式不同进行动物分组:对照组,大鼠只进行麻醉和CPB插管,不进行CPB转流;模型组:大鼠进行30min深低温停循环;干预组:大鼠经舌下静脉注射0.3mg/kg PPAR-γ选择性激动剂罗格列酮 (ROSI)30 min后,进行30min深低温停循环;以上每组动物10只。
1.2 组织标本采集 大鼠处死后取右肺固定于4%甲醛溶液中,梯度蔗糖溶液脱水,石蜡包埋,切片,片厚为4μm;组织经脱蜡后,进行苏木精和伊红染色,镜下观察组织结构病理变化;取左肺分放于冻存管中,置于-80℃保存,以备下一步实验测定。
1.3 Western blotting检测 取出-80℃保存的左肺组织,提取组织总蛋白,蛋白上样,行SDS-PAGE电泳分离,硝酸纤维素膜转膜,封闭,再进行一抗、二抗处理,室温脱色摇床避光处理1h,洗膜,荧光系统扫描,应用β-actin作内参,记录每个条带灰度积分值;采取NIH Image图像软件分析各指标平均吸光度值 (average absorbance ......
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