升红颗粒质量标准研究(1)
【摘要】目的：建立升红颗粒的质量控制标准。方法：采用薄层色谱法(TLC)对制剂中鸡血藤、花生红衣进行定性鉴别；采用高效液相色谱法(HPLC)对制剂中儿茶素进行含量测定。色谱柱：SEPAX Amethyst C18(4.6mm×250mm，5μm)；流动相：水-甲醇-乙腈-冰醋酸(90∶5∶5∶0.4)；流速：0.8ml/min；检测波长：280nm；柱温：35℃。结果：TLC谱斑点清晰，分离度良好，阴性对照无干扰。儿茶素进样量在0.0982～3.9269μg范围内与其峰面积积分值呈良好的线性关系(r=0.9999)；平均加样回收率为92.32%，RSD=2.72%(n=6)。结论：该方法简便、快捷、重现性好，可用于升红颗粒的质量控制。
【关键词】升红颗粒；质量标准；薄层色谱法；儿茶素；高效液相色谱法
【中图分类号】R286 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517(2016)03-0014-03
升红颗粒是根据我院肿瘤科临床验方开发的纯中药复方制剂，由鸡血藤、花生红衣、大枣、枸杞子4味药材制成，具有活血补血、健脾养血、滋补肝肾的功效，临床用于治疗肿瘤患者化疗所致的血小板、白细胞减少等症。研究证实，方中的鸡血藤[1]、花生红衣[2]均含有刺激造血祖细胞增殖的儿茶素类成分，且鸡血藤的黄酮类成分还具有促进血虚动物模型造血功能[3]。研究采用薄层色谱法对制剂中的鸡血藤、花生红衣进行鉴别，采用HPLC法对制剂中儿茶素进行含量测定，取得了满意的效果。
1 仪器与试药
1.1 仪器 Agilent HP1100系列高效液相色谱仪(包括Agilent G1310A单元泵、Agilent G1316A柱温箱、Agilent G1314A可变波长检测器，美国Agilent公司) ；威玛色谱工作站；B2500S-MT型超声波清洗器 (必能信超声上海有限公司)；FA2004电子天平(上海精密科学仪器有限公司)；
1.2 材料 升红颗粒(批号： 141010、141018、141027，自制)；儿茶素对照品(批号：110877-201203)、芒柄花素对照品(批号：111703-200603)、鸡血藤对照药材(批号：121173-201103)、花生红衣对照药材(批号：121491-200401)均由中国食品药品检定研究院提供；甲醇、乙腈为色谱纯，其余试剂为分析纯；高效硅胶G薄层板(10cm×10cm，青岛海洋化工厂)。
2 方法与结果
2.1 TLC鉴别
2.1.1 鸡血藤的TLC鉴别[4-5] 取本品3.0g，加二氯甲烷25ml，浸泡30min后，超声 (功率：100W；频率：40kHz)处理 20min，滤过，滤液水浴蒸干，残渣加甲醇5ml使溶解，摇匀，作为供试品溶液。另取芒柄花素对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.5mg芒柄花素的溶液，作为芒柄花素对照品溶液。另取鸡血藤对照药材2.0g，照上述供试品溶液的制备方法制成鸡血藤对照药材溶液。按处方量称取不含鸡血藤的其他饮片各适量，照升红颗粒的制备方法，制成缺鸡血藤阴性样品，取缺鸡血藤阴性样品3.0g，照上述供试品溶液的制备方法制成缺鸡血藤的阴性样品溶液。按照2010年版 《中国药典》(一部) 附录VIB的薄层色谱(TLC)法试验，吸取上述4 种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G 薄层板上，以二氯甲烷-石油醚-甲醇(5∶15∶1) 为展开剂，展开，取出，晾干，置254nm 紫外光灯下检视。结果供试品色谱中在与对照品色谱及对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性对照色谱无相应的斑点。见图1。[JP]
2.1.2 花生红衣的TLC鉴别[6] 取本品3.0g，加乙酸乙酯25ml，浸泡30min后，超声 (功率：100W，频率：40kHz) 处理20min，滤过，滤液水浴蒸干，残渣加甲醇5ml使溶解，摇匀，作为供试品溶液。另取花生红衣对照药材2.0g，照上述供试品溶液的制备方法制成花生红衣对照药材溶液。按处方量称取不含花生红衣的其他饮片各适量，照升红颗粒的制备方法，制成缺花生红衣阴性样品，取缺花生红衣阴性样品3.0g，照上述供试品溶液的制备方法制成缺花生红衣阴性样品溶液。按照2010年版 《中国药典》(一部) 附录VIB的薄层色谱法试验，吸取上述3 种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G 薄层板上，以二氯甲烷-石油醚-甲醇-乙酸(8∶3∶1∶2) 为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2%香草醛硫酸乙醇溶液，于105℃加热至斑点显色清晰，放冷，置日光下检视。结果供试品色谱中， 在与花生红衣对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的紫红色斑点，阴性对照液色谱无相应的斑点。见图2。
2.2 含量测定[7]
2.2.1 色谱条件 色谱柱：SEPAX Amethyst C18 (250mm×4.6mm，5μm)；流动相：水-甲醇-乙腈-冰醋酸(90∶5∶5∶0.4)；流速：0.8ml/min；检测波长：280nm；柱温：35℃；进样量：20μl。
2.2.2 对照品溶液的制备 取儿茶素对照品适量，精密称定，置于量瓶中，加甲醇制成每1ml含0.9817mg的溶液，即得。[JP]
2.2.3 供试品溶液的制备 取样品研细，精密称定约1g，置于具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇25ml，称定质量，浸泡30min后，超声(功率：100W，频率：40kHz)处理20min，放冷，再次精密称定，加50% 甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.2.4 阴性样品溶液的制备 取缺鸡血藤和花生红衣的阴性样品适量，按“2.2.3”项下方法制成阴性样品溶液，即得。[JP]
2.2.5 系统适用性试验 取上述对照品溶液、供试品溶液及阴性样品溶液各20μl，分别按“2.2.1”项下色谱条件进样测定，记录色谱图。结果，色谱峰基线平稳，供试品溶液中儿茶素与其它组分分离度良好，阴性无干扰；理论塔板数按儿茶素峰计算应不低于4000，分离度>1.5，拖尾因子：0.96。色谱见图3。, 百拇医药(廖曾珍 邓俊刚 李江 邓航 付翔 毛柳珺 甘洁静 林家怡)
【关键词】升红颗粒；质量标准；薄层色谱法；儿茶素；高效液相色谱法
【中图分类号】R286 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517(2016)03-0014-03
升红颗粒是根据我院肿瘤科临床验方开发的纯中药复方制剂，由鸡血藤、花生红衣、大枣、枸杞子4味药材制成，具有活血补血、健脾养血、滋补肝肾的功效，临床用于治疗肿瘤患者化疗所致的血小板、白细胞减少等症。研究证实，方中的鸡血藤[1]、花生红衣[2]均含有刺激造血祖细胞增殖的儿茶素类成分，且鸡血藤的黄酮类成分还具有促进血虚动物模型造血功能[3]。研究采用薄层色谱法对制剂中的鸡血藤、花生红衣进行鉴别，采用HPLC法对制剂中儿茶素进行含量测定，取得了满意的效果。
1 仪器与试药
1.1 仪器 Agilent HP1100系列高效液相色谱仪(包括Agilent G1310A单元泵、Agilent G1316A柱温箱、Agilent G1314A可变波长检测器，美国Agilent公司) ；威玛色谱工作站；B2500S-MT型超声波清洗器 (必能信超声上海有限公司)；FA2004电子天平(上海精密科学仪器有限公司)；
1.2 材料 升红颗粒(批号： 141010、141018、141027，自制)；儿茶素对照品(批号：110877-201203)、芒柄花素对照品(批号：111703-200603)、鸡血藤对照药材(批号：121173-201103)、花生红衣对照药材(批号：121491-200401)均由中国食品药品检定研究院提供；甲醇、乙腈为色谱纯，其余试剂为分析纯；高效硅胶G薄层板(10cm×10cm，青岛海洋化工厂)。
2 方法与结果
2.1 TLC鉴别
2.1.1 鸡血藤的TLC鉴别[4-5] 取本品3.0g，加二氯甲烷25ml，浸泡30min后，超声 (功率：100W；频率：40kHz)处理 20min，滤过，滤液水浴蒸干，残渣加甲醇5ml使溶解，摇匀，作为供试品溶液。另取芒柄花素对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.5mg芒柄花素的溶液，作为芒柄花素对照品溶液。另取鸡血藤对照药材2.0g，照上述供试品溶液的制备方法制成鸡血藤对照药材溶液。按处方量称取不含鸡血藤的其他饮片各适量，照升红颗粒的制备方法，制成缺鸡血藤阴性样品，取缺鸡血藤阴性样品3.0g，照上述供试品溶液的制备方法制成缺鸡血藤的阴性样品溶液。按照2010年版 《中国药典》(一部) 附录VIB的薄层色谱(TLC)法试验，吸取上述4 种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G 薄层板上，以二氯甲烷-石油醚-甲醇(5∶15∶1) 为展开剂，展开，取出，晾干，置254nm 紫外光灯下检视。结果供试品色谱中在与对照品色谱及对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性对照色谱无相应的斑点。见图1。[JP]
2.1.2 花生红衣的TLC鉴别[6] 取本品3.0g，加乙酸乙酯25ml，浸泡30min后，超声 (功率：100W，频率：40kHz) 处理20min，滤过，滤液水浴蒸干，残渣加甲醇5ml使溶解，摇匀，作为供试品溶液。另取花生红衣对照药材2.0g，照上述供试品溶液的制备方法制成花生红衣对照药材溶液。按处方量称取不含花生红衣的其他饮片各适量，照升红颗粒的制备方法，制成缺花生红衣阴性样品，取缺花生红衣阴性样品3.0g，照上述供试品溶液的制备方法制成缺花生红衣阴性样品溶液。按照2010年版 《中国药典》(一部) 附录VIB的薄层色谱法试验，吸取上述3 种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G 薄层板上，以二氯甲烷-石油醚-甲醇-乙酸(8∶3∶1∶2) 为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2%香草醛硫酸乙醇溶液，于105℃加热至斑点显色清晰，放冷，置日光下检视。结果供试品色谱中， 在与花生红衣对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的紫红色斑点，阴性对照液色谱无相应的斑点。见图2。
2.2 含量测定[7]
2.2.1 色谱条件 色谱柱：SEPAX Amethyst C18 (250mm×4.6mm，5μm)；流动相：水-甲醇-乙腈-冰醋酸(90∶5∶5∶0.4)；流速：0.8ml/min；检测波长：280nm；柱温：35℃；进样量：20μl。
2.2.2 对照品溶液的制备 取儿茶素对照品适量，精密称定，置于量瓶中，加甲醇制成每1ml含0.9817mg的溶液，即得。[JP]
2.2.3 供试品溶液的制备 取样品研细，精密称定约1g，置于具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇25ml，称定质量，浸泡30min后，超声(功率：100W，频率：40kHz)处理20min，放冷，再次精密称定，加50% 甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.2.4 阴性样品溶液的制备 取缺鸡血藤和花生红衣的阴性样品适量，按“2.2.3”项下方法制成阴性样品溶液，即得。[JP]
2.2.5 系统适用性试验 取上述对照品溶液、供试品溶液及阴性样品溶液各20μl，分别按“2.2.1”项下色谱条件进样测定，记录色谱图。结果，色谱峰基线平稳，供试品溶液中儿茶素与其它组分分离度良好，阴性无干扰；理论塔板数按儿茶素峰计算应不低于4000，分离度>1.5，拖尾因子：0.96。色谱见图3。, 百拇医药(廖曾珍 邓俊刚 李江 邓航 付翔 毛柳珺 甘洁静 林家怡)