糖尿病心肌PTEN蛋白表达变化及其在糖尿病心肌IPo中的影响(2)
组织学方法(HE染色):心脏组织切片放入二甲苯中脱蜡10min,无水酒精洗去二甲苯。经苏木精染色3min,1%盐酸酒精分化20s,1%稀氨水返蓝30s,伊红水溶液复染1min后完成染色。染色好的玻片经过梯度酒精脱水,二甲苯透明后用中性树胶封片。最后光镜下观察染色结果:細胞核呈兰色,胞浆呈红色。PTEN、PT-3K、p-Akt(Ser473)免疫组化测定及TUNEL法检测心肌细胞凋亡。实验步骤严格按照免疫组化试剂盒说明书进行。
心肌梗死面积检测(TTC法):参照文献方法进行,用Image-ProPlus6.0图像分析软件勾勒出每片薄片的缺血区、梗死区及总面积,得出的梗死面积百分比。心梗死面积百分比=心肌梗死区面积/心肌缺血区面积×100%。
1.3统计学处理 所有数据采用SPSS 17.0统计软件进行分析,计量资料以均数±标准差(x±s)表示,不同处理组问采用one-way ANOVA Student-Newman-Keuls(SNK)test进行方差分析。P<0.05为有统计学差异 ......
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