杨冬萍 杨晓旭 俞 洋,2*.宁夏医科大学中医学院，宁夏 银川 750004；2.回医药现代化省部共建教育部重点实验室，宁夏 银川 740004

    高温对体外培养的兔视网膜色素上皮细胞的影响

    杨冬萍1杨晓旭1俞 洋1,2*

    1.宁夏医科大学中医学院，宁夏 银川 750004；2.回医药现代化省部共建教育部重点实验室，宁夏 银川 740004

    目的：观察高温对体外培养的兔视网膜色素上皮(retinal pigment epithelial cells，RPE)细胞的影响。方法：以体外培养的兔RPE细胞为研究对象，采用55℃水浴加热法对细胞进行不同时间(3、5、8min)加温处理，处理结束后立即进行CCK-8法检测细胞活性、流式细胞仪测定细胞凋亡、透射电镜观察细胞形态学变化。结果：55℃水浴各时间组OD值明显低于对照组，差异有统计学意义(P1 仪器与材料

    1.1 材料 CCK-8试剂(日本同仁化学)，Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒(上海贝博生物有限公司)，兔RPE细胞(赛齐(上海)生物工程有限公司)。

    1.2 仪器 E680酶联免疫检测仪(BIO-RAD公司)；流式细胞仪(美国BD公司)；电热恒温水浴锅(绍兴木可桥医疗器械厂)。

    2 方法

    2.1 兔RPE细胞的培养 兔RPE细胞培养条件为：10% DMEM完全培养基(含100U/mL青霉素，100mg/L链霉素)，于37℃、5%CO2培养箱中培养。

    2.2 细胞处理 取若干瓶对数生长期的兔RPE细胞，弃旧培养液，温PBS洗涤2遍，0.25%胰蛋白酶消化约3min,镜下观察细胞回缩变圆、变亮，立即终止消化，用吸管吸取部分培养液，轻轻将细胞从瓶壁吹打下来，分别移入若干离心管中。

    2.3 实验分组 ①对照组，细胞不做任何处理；②55℃水浴3min组；③55℃水浴5min组；④55℃水浴8min组。

    2.4 CCK-8法测定细胞活性 将加温处理的各管细胞接种于96孔板中，每孔100μL，再避光加入CCK-8试剂，继续孵育4h后，在酶标仪上测量其OD值。酶标仪的内置检测波长为450nm。

    2.5 Annexin V-FITC/PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡 上述各组细胞于处理时间结束后 ......