李东娴 杜春华 牛延菲 曹红云 普冰清 游 燕云南白药集团创新研发中心/云南省药物研究所/云南省中药和民族药新药创制企业重点实验室，云南 昆明 650111

    大黄饮片微生物限度检查方法适用性研究

    李东娴 杜春华 牛延菲 曹红云 普冰清 游 燕*

    云南白药集团创新研发中心/云南省药物研究所/云南省中药和民族药新药创制企业重点实验室，云南 昆明 650111

    目的：研究大黄饮片微生物限度检查的方法。方法：按《中国药典》2015年版通则1105、1106、1107进行方法的建立和验证。结果：大黄饮片对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢菌、乙型副伤寒沙门菌有一定的抑制作用,故需氧菌计数采用培养基稀释法进行检测，霉菌和酵母菌计数、耐胆盐革兰氏阴性菌、大肠埃希菌使用常规法进行检测，沙门菌检测中使用300mL胰酪大豆胨液体培养基进行增菌培养。结论：该方法可以用于大黄的微生物限度检查。

    大黄；微生物限度；方法适应性

    中药材的品质关系着中成药的质量和使用中药材患者的健康，《中国药典》2015版已经对中药提取物和中药饮片的微生物限度做出了规定[1]，但国内关于中药饮片微生物限度检查的研究却不多。

    大黄为蓼科植物掌叶大黄RheumpalmatumL.、唐古特大黄RheumtanguticumMaxim.ex Balf.和药用大黄RheumofficinaleBaill.的干燥根茎，主要功效为泻下通便、清热解毒、活血化瘀等[2]，并具有一定的抑菌作用[3-8]。文献报道，大黄对幽门螺旋杆菌具有很强的抑菌活性[2]，大黄蒽醌衍生物也对葡萄球菌、链球菌有显著抗菌功效，药典中规定的方法适应性验证试验菌株如铜绿假单胞菌、大肠埃希菌也可以在大黄蒽醌衍生物的抗菌谱中找到[4]，同时大黄对肺炎克雷伯菌[5]、沙眼衣原体[6]、粪肠球菌[7]等也有体外抑菌活性。

    对具有抑菌作用的药品进行微生物限度检查方法适应性验证，一直是微生物检测工作中的难点，笔者对大黄饮片进行微生物检查法进行方法学考察，可以为研究中药材微生物限度检查法提供相关理论基础，并对含大黄的中成药的微生物限度检查具有一定的参考价值。

    1 实验材料

    1.1 样品 大黄饮片(云南健之佳连锁健康药房，购买不同连锁店共3批药材，编号为1、2、3号样，经云南省药物所究所天然药物资源研究中心高级工程师邱斌鉴定来源于蓼科植物掌叶大黄RheumpalmalumL.)。

    1.2 稀释剂及培养基 pH 7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液、胰酪大豆胨液体培养基、胰酪大豆胨琼脂培养基、沙氏葡萄糖液体培养基、沙氏葡萄糖琼脂培养基、麦康凯液体培养基、麦康凯琼脂培养基、肠道增菌肉汤、紫红胆盐葡萄糖琼脂培养基、RV沙门菌增菌液体培养基、木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基 ......