定时观察细胞的生长状态，选取对数期细胞用于实验；当细胞生长到镜下观察覆盖80%～90%、细胞伸展成不规则形态时，用0.25%胰蛋白酶消化液进行消化，至细胞缩成小圆形并呈現部分轻轻浮动现象时，终止消化，弃去消化液。然后向其中加入5mL培养基，用吸管吹下贴壁的Leydig细胞，进行细胞活度测定后，准备铺板。前期已对细胞铺板密度进行考察，将细胞铺板密度定为105个/mL。用含有10%胎牛血清的D-MEM/F12培养液调整细胞密度至105个/mL，取100μL/孔的细胞悬浮液接种于96孔板(铺板)，放入37℃、5%CO2 的培养箱内培养2d，给药进行实验。

    其中在细胞活力检测阶段：截取时间点分别为4h、12h、24h、48h、72h、96h、120h，分别给每孔加入20μL MTT试液，继续于培养箱中培养4h，将液体倒出，每孔加入100μL DMSO，置于酶标仪震荡10min，在490nm波长下测定吸光度，以吸光度OD值为纵坐标、时间为横坐标，绘制睾丸间质细胞的生长曲线，如图1所示。

    由生长曲线可知：细胞处于正常生长状态，在72h左右 ......