告达庭衍生物抑制人乳腺癌细胞增殖及其作用机制研究
糖苷,培养箱,细胞周期,1仪器与材料,2方法,3结果,4讨论
1.衢州职业技术学院医学院,浙江 衢州 324000;2.浙江医药高等专科学校,浙江 宁波 315100乳腺癌是全球女性中最常见的肿瘤之一,其发病率居女性肿瘤之首,现已经成为影响女性健康最主要的原因[1]。据统计,2012年全球乳腺癌新增病例数约有167万,占所有肿瘤的25%[2]。在中国女性当中,每年乳腺癌新增病例和死亡病例分别占到全世界的 12.2%和9.6%[3],所以乳腺癌的诊断和治疗显得尤为重要。目前乳腺癌最常见的治疗手段为手术、放化疗、内分泌和靶向药物治疗,但是由于乳腺癌自身特点术后易引起复发且大多数药物会产生极大的副作用和耐药[4-5],寻求新的、高效低毒的治疗乳腺癌的药物变得尤为重要。
中药在综合治疗癌症方面取得了良好的疗效,越来越受到相关研究者的关注[6]。白首乌为萝藦科鹅绒藤属植物耳叶牛皮消(Cynanchum auriculatum Royle ex Wight)的干燥块根,是传统的补益中药。中医理论认为,白首乌具有补肝肾、强筋骨、黑须发及延年益寿等功效,药理研究表明,白首乌具有抗衰老、抗炎、抗肿瘤、增强免疫、保肝等活性。白首乌的主要活性成分为C21甾体苷类化合物,许多研究表明其具有良好的抗肿瘤活性[7-10]。而告达庭(Caudatin)为C21甾体苷元,可从白首乌中分离得到。据研究报道,告达庭对人胃癌、肝癌、肺癌等多种肿瘤均具有明显的抑制作用[11-13]。在生物体中告达庭主要以糖苷的形式存在,本研究在前人研究基础上,探讨告达庭衍生物,告达庭-3-O-β-D-加拿大麻糖苷(告达庭-3-O-β-D-吡喃磁麻糖苷,caudatin-3-O-β-D- cymaropyranoside),对人乳腺癌细胞抗肿瘤活性及相关的作用机制。
1 仪器与材料
1.1 细胞株 人乳腺癌细胞株MDA-MB-231和MCF-7购自中国科学院上海生命科学研究院细胞资源中心。
1.2 药物 告达庭-3-O-β-D-加拿大麻糖苷(Ca-G)自制,取耳叶牛皮消的块根,粉碎,80%乙醇溶液渗漉提取,减压浓缩成浸膏。加水混悬,用乙酸乙酯萃取,浓缩萃取液,进行硅胶柱色谱分离,以氯仿-甲醇(体积比80∶1→5∶1)梯度洗脱,流分经硅胶柱色谱和HPLC制备,得Ca-G,纯度>98%,配制成10 mg/ml的母液,溶剂为DMSO,于-20 ℃分装保存。
1.3 试剂 胎牛血清、DMEM培养液购自美国Invitrogen公司;DMSO、MTT购自美国Sigma公司;BCA 蛋白浓度测定试剂盒 ......
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