苦荞麦总黄酮对2型糖尿病大鼠胰岛素信号转导通路中GSK-3β、AKt相关基因与蛋白表达的影响
高脂,1实验材料,2方法,3结果,4讨论
辽宁中医药大学,辽宁 沈阳 110032糖尿病(Diabetes Mellitus,DM)是一种发病率极高的代谢性疾病,已严重影响人类生活。据国际糖尿病联盟(the International Diabetes Federation,IDF)发布的第八版全球糖尿病地图数据显示,2017年全球共有4.25亿糖尿病患者,其中中国患病人数最多[1],90%~95%为2型糖尿病(Type 2 diabetes mellitus,T2DM)[2]。T2DM的病理机制与胰岛β细胞功能失常和胰岛素抵抗关系十分密切,其在环境、遗传等因素的影响下通常表现为胰岛素抵抗(Insulin Resistance,IR)[3]。糖原合成激酶-3β(Glycogen synthase kinase 3β,GSK-3β)是胰岛素受体信号转导通路中一个关键节点,它在细胞中过度表达会引起胰岛素信号转导受阻,引起IR[4-7],有实验表明抑制GSK-3β活性可改善小鼠的糖耐量水平,使肝糖原代谢增加进而增加肝糖原含量[8]。在胰岛素信号转导通路中,激活的蛋白激酶B(Protein kinase B,AKT)可使GSK-3β磷酸化从而失活达到降血糖的目的。因此,促进Akt表达从而抑制GSK-3β可以减轻胰岛素抵抗,改善糖耐量水平,产生潜在的抗糖尿病效果[9]。
苦荞麦作为一种药食两用的植物,在国内外被广泛种植[10]。其黄酮类化合物在医药保健方面具有降血糖、降血脂、降血压、抗氧化、抗肿瘤、增强免疫力及保护心脑血管等多种功效[11-12]。研究通过观察苦荞麦总黄酮对Ⅱ型糖尿病胰岛素信号转导通路中GSK-3β和Akt基因与蛋白的表达情况的影响,测定各组大鼠肝组织中mRNA与蛋白含量,探讨苦荞麦总黄酮对Ⅱ型糖尿病影响的作用与机制。
1 实验材料
1.1 动物与饲料 SPF级wistar大鼠78只,雄性,许可证号SCXK(辽)2015-0001 辽宁长生生物技术有限公司。高脂饲料和普通饲料(沈阳市于洪区前民动物实验饲料厂);猪油和蔗糖(沈阳市和平区金味源食品批发部)。
1.2 药品与试剂 苦荞麦总黄酮(日本三益制药株式会社,含量为991.65 mg/g);二甲双胍(批号:20150617,沈阳维康医药连锁有限公司);链脲佐菌素(批号:1122F032,solarbio);胰岛素ELISA试剂盒;氯仿、异丙醇、无水乙醇(20150607)国药集团化学试剂有限公司;RT-PCR试剂盒(AK5701),核酸Marker(A801A),上、下游引物(CHPA194);SDS-PAGE凝胶制备试剂盒(批号:20151222 ......
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