李赛妮 陈玉婵 刘洪新 朱牧孜 章卫民

    广东省微生物研究所/华南应用微生物国家重点实验室/广东省菌种保藏与应用重点实验室/广东省微生物应用新技术公共实验室，广东 广州 510070

    植物内生真菌(Endophytic fungi)是一类重要的微生物资源，其生活在植物体内的特殊环境中，在演化过程中与宿主植物形成了互惠共生关系，能产生与宿主相同或相近的代谢产物，甚至能产生新型生物活性物质，在医药、农业以及病虫害的防治等领域具有重要的应用价值，已成为国内外研究的热点领域[1]。

    垂枝红千层(Callistemonviminalis)为桃金娘科(Myrtaceae)红千层属(Callistemon)植物，原产于澳大利亚，国内多个地区都有栽种，广泛用于绿化、园艺观赏、入药和制取精油等[2]。红千层属植物的化学成分和生物活性研究表明，其枝叶含有间苯三酚类及黄酮类等化合物[3-5]，具有抗菌、抗肿瘤、抗氧化、杀虫和免疫调节等多种生物活性[6-8]。迄今垂枝红千层内生真菌及其代谢产物研究未见报道。为了充分发掘该植物的内生真菌资源，本研究对采自华南植物园的垂枝红千层进行内生真菌的分离和鉴定，探讨垂枝红千层内生真菌的多样性，并对分离到的内生真菌的发酵粗提物进行抗菌和细胞毒活性研究，旨在筛选出具有生物活性的菌株，为进一步研究其活性代谢产物提供理论依据。

    1 材料与仪器

    1.1 材料

    1.1.1 植物材料、供试菌株及细胞株 垂枝红千层健康植株于2016年01月采自广州华南植物园。

    供试指示菌细菌为金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus，SA) 、大肠杆菌(Escherichiacoli，EC)、枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis，BS)。

    供试肿瘤细胞株为神经胶质瘤细胞(SF-268)、乳腺癌细胞(MCF-7)、大细胞肺癌细胞(NCI-H460)、肝癌细胞(HepG-2)。以上所有菌株和细胞株均保藏于广东省微生物研究所。

    1.1.2 培养基分离 培养基为PDA双抗培养基：马铃薯 200 g，葡萄糖 20 g，KH2PO43 g，KH2PO43 g，MgSO4·7H2O 1.5 g ......