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编号:13847216
南蛇藤总萜类化合物对人脐静脉内皮细胞增殖抑制及诱导凋亡的实验研究(2)
http://www.100md.com 2020年3月15日 《中国民族民间医药·上半月》 202006
     1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 细胞培养 人脐静脉内皮细胞(HUVECs)由扬州大学医学院医学分子生物研究所提供,用含10%小牛血清的DMEM培养液(另加青霉素100KU/L、链霉素100mg/L)于37℃、5% CO2、饱和湿度培养箱内培养,取对数生长期细胞进行实验。

    1.1.2 药物提取 南蛇藤茎经本课题组合作方,中国药科大学王强教授课题组完成萜类化合物的提取及鉴定[8]。提取流程:同批次的南蛇藤藤茎切断,粉碎成粉,烘干,95%乙醇加热回流提取3次,旋转蒸发仪回收溶剂得到浸膏,拌入硅藻土,真空低温抽干,再用乙酸乙酯热水浴加热回流,过滤,回收得到乙酸乙酯浸膏(总萜类化合物含量68.3%),提取物得率约2%。

    1.1.3 主要试剂及仪器 DMEM培养基购于Gbico公司;四甲基偶氮唑盐(MTT)购自于Sigma公司;小牛血清购自杭州四季青公司;碘化丙啶(PI)购自晶美公司;鼠抗人Bcl-2单克隆抗体购自Abd serotec公司;异硫氰酸荧光素(FITC)标记羊抗鼠IGg购自碧云天生物公司;人血管内皮细胞生长因子(VEGF)ELISA试剂盒购自博士德生物公司;倒置相差显微镜(OLYMPUS)购自日本;CO 2恒温孵箱(REVCO)购自美国;酶标仪(Labsystems Dragon)购自芬兰;流式细胞仪(FACSAria)购自于美国BD公司 ......
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