1.2 动物实验 48只昆明小鼠(18～22 g)，♀♂各半，购自湖北省实验动物中心。动物饲养在温度(22±2)℃，12 h光照循环的房间中。将小鼠随机分为8组，每组♀♂各3只。选取不同的时间，连续7 d腹腔注射给药，在此期间，观察记录小鼠的临床表现，并持续记录小鼠的体重变化。最后一次给药后，分别在10：00和22：00处死小鼠，取肝脏组织约50～100 mg放入Trizol液中低温冻存。具体实验方案如图2所示。

    1.3 实时荧光定量 RT-PCR 法检测 采用实时荧光定量 RT-PCR 方法，以β-actin作为参照基因，检测Bmal1、Clock生物钟基因的相对表达水平。Trizol试剂从细胞中提取总RNA。使用PrimeScriptTM RT reagent Kit with gDNA Eraser试剂盒将总RNA逆转录为cDNA，Master Mix10 μL 分别为 PrimerScript RT Enzyme Mix I(1.0 μL)、 RT Primer Mix×4(1.0 μL)、5×PrimeScript Buffer 2(for Real-time)(4.0 μL)、RNase Free dH2O(4.0 μL) ......