汝 晶 陈 嵘 郑 梅 李明泓 张 珊

    云南中医药大学基础医学院，云南 昆明 650500

    胃癌是一种在全球范围内预后差、致死率高的恶性消化系统肿瘤，大约90%的胃部肿瘤都属于腺瘤[1]。一般认为外科手术是对其进行根治的唯一疗法，同时辅以放化疗。然而，由于早期胃癌的诊断率低，大多数患者发现就是进展期或晚期，错过最佳的手术窗口期，增加胃癌的致死率[2]。目前在临床上主要使用卡培他滨、顺铂、氟尿嘧啶等在内的化疗药物进行联合治疗。但化疗药物副作用明显，且长期使用会损害机体的多个器官系统[3]。中药具有良好的抗肿瘤活性，且毒副作用小。生物碱类是中药有效成分中的重要组成之一，具有抗肿瘤、抗炎、抗病毒等多种生物活性[4]。乌头碱(aconitine)是存在于川乌、草乌、附子等药用植物的一种生物碱。传统中医理论认为，乌头类中药具有回阳救逆、温阳散寒等疗效；近些年临床应用和实验研究表明，其在抗肿瘤、强心、镇痛、调节免疫等方面具有特殊的功效。

    乌头碱对包括胃癌在内的多种恶心肿瘤都具有抑制肿瘤细胞增殖以及侵袭的作用[5-6]。将乌头碱注射液稀释后接种胃癌FC的615纯系小鼠，结果显示实验组瘤重抑制率显著高于对照组[7]；王冠庭[8]发现以乌头碱注射液治疗晚期胃癌患者，3个疗程后，患者症状改善，梗阻症状消失。然而目前乌头碱在临床上的应用却受到限制，一方面是由于其使用剂量及毒性；另一方面则是其抗肿瘤作用机制的研究还十分有限。

    miR-23a是定位于人19号染色体的一种非编码微小RNA，与胃癌、乳腺癌、结肠癌等多种恶性肿瘤的发生发展相关，被视为一个癌基因[9-11]。利用生物信息学方法(综合TargetScan、MirBase两个网站信息)预测出IRF1为miR-23a的可能靶基因，且已知报道miR-23a在胃腺癌组织中高表达，并通过下调其下游靶蛋白干扰素调节因子1(IRF1)参与调节胃腺癌细胞的增殖[12-13]，两者之间的靶定关系在肝癌细胞中也同样存在[14]。而乌头碱的抑癌作用是否与参与调节miR-23a及其通路相关，这一点仍需进一步研究。本研究在细胞及分子水平，使用乌头碱对细胞进行处理，通过观察细胞增殖与凋亡情况，检测目标基因及靶蛋白水平的变化，探讨乌头碱抗肿瘤作用miRNA水平的机制，为临床上合理应用乌头碱治疗胃癌提供相关的实验基础与理论依据。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 药物与试剂 乌头碱(批号BBP03866 ......